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II. 1. Einleitung Augen und im zentralen Nervensystem führt. Die Detektion der Expression wird durch die Verwendung eines genetischen Hintergrundes mit einer Mutation des vermillion-Gens vereinfacht, die zu einem Verlust der Augenpigmentierung führt (Lorenzen et al., 2002). Diese Marker-Expression erlaubt die einfache Feststellung von Defekten der Augenentwicklung in embryonalen und vor allem in pupalen Sta- dien. Je nach Integrationsort kann dieses Konstrukt außerdem von benachbarten endogenen Enhancern aktiviert werden und zu gewebespezifischer Expression führen. 142 Die pupalen Injektionen werden mit dem Stamm pig19 durchgeführt. Dieser trägt eine Insertion des Enhancer-Trap-Konstrukts in einem aktin-Gen, was zu eGFP- Expression im Großteil der Körpermuskulatur der schlupfreifen Larve führt (Lorenzen et al., 2003; Lorenzen et al., 2007). Ventrale, laterale und dorsale Muskulatur in Thorax und Abdomen sind ebenso wie die Muskulatur des Kopfes deutlich zu erkennen (Abb. 25), und erlauben die Detektion von globalen Defekten dieser Muskel- gruppen. Auch die Muskulatur der larvalen Beine ist deutlich erkennbar und wird ein Schwerpunkt der Auswertung sein (Abb. 25, 1.4.3). Diesem genetischen Hintergrund soll für die Durchführung von iBeetle noch ein rot-fluoreszierender Marker im gesamten zentralen Nervensystem hinzugefügt werden, der die Detektion von neuralen Defekten erlauben soll. Für die larvalen Injektionen wird ein Stamm verwendet, der eine nicht lokalisierte Insertion eines minos-3xP3-eGFP Konstrukts trägt (Pavlopoulos et al., 2004), die zur GFP-Expression in Teilen der sich entwickelnden Muskulatur des dritten Thorakal- segments pupaler Stadien führt (mD17, Abb. 25). Dieses metathorakale Muster entwickelt sich in der Präpuppe und Puppe und bleibt auch in jungen adulten Käfern noch sichtbar bevor es dann zurückgeht. Die Enhancer-trap-Expression erlaubt somit die Analyse von Defekten während der Entwicklung der thorakalen adulten Muskula- tur. Für den iBeetle-Screen soll diesem Stamm noch ein Konstrukt hinzugefügt werden, das eine Y-chromosomale Insertion eines dominanten Augenpigmentmar- kers trägt (Lorenzen, nicht veröffentlicht) und so durch die vorhandene Augenfärbung eine einfache Unterscheidung von männlichen und weiblichen Larven zulässt.
Abb. 25: Für iBeetle verwendete Käferstämme II. 1. Einleitung Gezeigt sind Fluoreszenzaufnahmen der eGFP-Expression in dem für die pupalen Injektionen verwendeten pig19-Stamm (A - E) und dem md17-Stamm, der für larvale Injektionen verwendet wird (F, G). Die somatische Muskulatur in Kopf, Thorax und Abdomen einer frisch geschlüpften pig19- Larve ist in lateraler (A), dorsaler (D) und ventraler Ansicht (E) gut zu erkennen. Kurz vor dem Schlupf sind vor allem Details der Beinmuskulatur einer noch in der Eihülle befindlichen Larve in lateraler Ansicht nur schwer zu erkennen (B). Wird die Eihülle durch mechanische Belastung zum Platzen gebracht, können auch die coxale Muskulatur (cm), die femorale (fm) und die tibio-tarsale Muskulatur gut ausgewertet werden (C). In dorsaler Ansicht ist die eGFP-exprimierende metathorakale Muskulatur einer mD17-Puppe deutlich erkennbar (Pfeilspitze in G), während in ventraler Ansicht vor allem die als Transformationsmarker dienende Augenexpression sichtbar ist (Pfeilspitze in F). Anterior ist in allen Abbildungen links. 143
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Die Funktion von Genen der posterio
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Inhaltsverzeichnis 2.4.1. Die Segme
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Inhaltsverzeichnis 3.1.2. Die Auswe
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Abbildungsverzeichnis Abb. 24: Sche
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Abkürzungen Abkürzungen 8 AS: Ami
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Allgemeine Einleitung Allgemeine Ei
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Allgemeine Einleitung Tiere, hervor
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I. Kapitel: I. 1. Einleitung Die Fu
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I. 1. Einleitung 3; Davis und Patel
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I. 1. Einleitung 1.2. Drosophila me
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I. 1. Einleitung Butler, 1988). Int
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I. 1. Einleitung zur Phosphorylieru
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I. 1. Einleitung Gene ist in Tribol
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I. 1. Einleitung Die frühe Regulat
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I. 1. Einleitung wahrscheinlich üb
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I. 1. Einleitung wie in Vertebraten
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I. 1. Einleitung und Wharton, 1999)
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I. 1. Einleitung des nanos-Verlusts
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I. 1. Einleitung Außerdem zeigen n
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1.5. Ziele des ersten Kapitels der
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2. Ergebnisse I. 2. Ergebnisse 2.1.
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I. 2. Ergebnisse Abb. 6: Sequenzver
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Abb. 19: brain-tumor-RNAi führt zu
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II. 4. Material und Methoden bei de
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Allgemeine Diskussion Allgemeine Di
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Allgemeine Diskussion und Achsendet
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Anhang ACCCATCCGTACGGCTGCCGGGTCATTC
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238 43 1000 99 similar to Rab-prote
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Anhang gemischt embryonal letal von
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Literatur Literatur Abdel-Latief, M
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Literatur Bernstein, D., Hook, B.,
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Literatur Ciglar, L. und Furlong, E
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Literatur Falciani, F., Hausdorf, B
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Literatur Gutjahr, T., Vanario-Alon
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Literatur Kiger, A. A., Baum, B., J
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Literatur Lin, H. und Spradling, A.
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Literatur binding protein that phys
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Literatur Riddiford, L. M., Hiruma,
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Literatur Schüpbach, T. und Wiesch
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Literatur Tomoyasu, Y., Miller, S.
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Literatur Zhang, X. D. und Heyse, J
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