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I. 2. Ergebnisse
darzustellen. Möglicherweise unterschreitet das embryonale Expressionsniveau von
Tribolium nanos die Detektionsschwelle der whole-mount in-situ-Hybridisierung.
Abschließend bleibt also unklar, ob die nanos-Aktivität auch in Tribolium durch eine
posteriore Lokalisierung der RNA-Expression räumlich begrenzt wird.
Abb. 8: nanos ist in allen getesteten Entwicklungsstadien exprimiert
UV-Transilluminationsaufnahme der gelelektrophoretisch aufgetrennten Produkte mehrerer
RT-PCRs. Die Ergebnisse für ein Fragment des nanos Gens und eines des ribosomalen
Proteins 49 (Konopova und Jindra, 2007) als Positiv-Kontrolle und Referenzwert sind gezeigt.
A In embryonalen Stadien von 0-30 Stunden Entwicklungsalter bei ca. 30 °C ist nanos
durchgehend exprimiert. Die stärkere Amplifikation in dem 0-30 h Ansatz ist möglicherweise
auf Qualitätsschwankungen der Ausgangs RNA zurückzuführen.
B Auch in nicht befruchteten Eiern von unbegatteten Weibchen, sowie Larven verschiedenen
Alters, männlichen und weiblichen Puppen und männlichen und weiblichen Adulten lässt sich
nanos RNA nachweisen.
C Kontrollen zeigen, dass keinerlei Verunreinigungen durch genomische DNA auftraten.
Sowohl ohne RNA Matrize als auch ohne Reverse Transkriptase kann keine Amplifikation
erfolgen, was zeigt, dass weder die Reaktionsreagenzien noch die Ausgangs-RNA verunreinigt
sind. Die forward-Primer beider Fragmente liegen auf einer Exon-Grenze, was effektiv
die Amplifikation von genomischer DNA verhindert, während Primer innerhalb der Exons
problemlos ein genomisches nanos Fragment liefern.
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