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II. 2. Ergebnisse
eine verlängerte Larvalphase, wie sie ebenfalls nach larvaler RNAi beschrieben
wurde (Suzuki et al., 2009), konnte aber nur bei 4 von 9 Tieren beobachtet werden.
Diese Beispiele machen deutlich, dass die Sensitivität des iBeetle-Screens massiv
von den definierten Schwellenwerten für die Mindest-Frequenz eines auftretenden
Phänotyps abhängen wird.
Vier der Positiv-Kontroll-Injektionen führten zu stärkeren Defekten als den bisher
beschriebenen. Nach pupaler empty-spiracles(ems)-RNAi fanden sich in den Präpa-
raten statt Larven mit subtilen Defekten der Antennen (Schinko et al., 2008), nur
unbefruchtete oder wenig entwickelte Eier. In Anbetracht der normalerweise schwa-
chen Defekte nach pupaler ems-RNAi (Schinko et al., 2008), muss davon ausgegan-
gen werden, dass es sich in diesem Fall um ein Artefakt handelt. Möglicherweise war
hier eine Kontamination der Positiv-Kontroll-RNA vorhanden, oder suboptimale
Bedingungen innerhalb des betroffenen Wells (Verschmutzung etc.) störten die
Verpaarung der Tiere.
distal-less und sex-combs-reduced-pRNAi führte neben den veröffentlichten
Phänotypen (Curtis et al., 2001; Suzuki et al., 2009) auch zu schwer zu interpretier-
baren Kutikularesten. Diese zusätzlichen Phänotypen könnten natürlicherweise
sporadisch auftretenden Abberationen darstellen. Solche Defekte finden sich zu
einem gewissen Anteil in jeder Präparation. Angesichts weiterer, durch die RNAi
hervorgerufener Defekte, könnten diese möglicherweise ebenfalls als spezifische
Effekte gewertet werden.
Im letzten Fall, pupaler RNAi gegen orthodenticle, führte die Injektion zu einer
höheren Penetranz des stärksten Phänotyps als bisher beschrieben. Kotkamp zeigt,
dass nach otd-RNAi 70 % der Embryonen keine Kutikula mehr sezernieren können
(Kotkamp et al., 2010). Hier war dies sogar bei 100 % der Fall, wobei in vielen emb-
ryonales Gewebe nachweisbar war. Scheinbar handelte es sich hierbei also um eine
äußerst effiziente Injektion.
Interessanterweise führten sechs der Positiv-Kontroll-Gene im Rahmen des
postembryonalen Screen-Teils zu bisher unbekannten Phänotypen (Abb. 38). Dies
illustriert, dass wahrscheinlich viele der in der Embryonalentwicklung untersuchten
Gene weitere Funktionen während der Metamorphose wahrnehmen.
Die eingesetzten Positiv-Kontrollen konnten also nahezu vollständig erkannt wer-
den und zeigen somit, dass durch das iBeetle-Prozedere das effektive Hervorrufen
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