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2. Ergebnisse
II. 2. Ergebnisse
2.1. Wie kann ein genomweiter RNAi-Screen verwirklicht werden?
Die Durchführung eines genomweiten Projekts mit den Dimensionen des iBeetle-
Screens erfordert eine sehr ausführliche und sorgfältige Planung, die sicherstellt,
dass alle gesetzten Ziele auch in der angestrebten Zeitspanne erreichbar sind. Das
iBeetle-Konzept sieht vor, dass während des Screens 18 unterschiedliche Ent-
wicklungs-Prozesse untersucht werden sollen (s. 1.4.3).
Für die Planung der praktischen Durchführung im Rahmen der hier vorliegenden
Arbeit ergaben sich daraus drei grundsätzliche Fragestellungen:
1. Ist die Analyse der zu untersuchenden Prozesse im Rahmen eines RNAi-
Screens möglich?
2. Wie können die dafür nötigen Untersuchungen durchgeführt und miteinander
verknüpft werden?
3. Ist die Durchführung in einem sinnvollen zeitlichen, personellen und finanziel-
len Rahmen realisierbar?
Zur Beantwortung dieser Fragen musste also zunächst eine Methodik entwickelt
werden, die die Analyse der 18 Prozesse auf effiziente Art und Weise erlaubt, um
diese dann im Praxistest auf den Prüfstand zu stellen. Dabei sollen zwar möglichst
alle Prozesse untersucht werden, es stellt sich jedoch immer die Frage der Wirt-
schaftlichkeit. Einzelne Untersuchungen sollen einfach und schnell durchführbar sein
und idealerweise in einem Schritt mehrere Aspekte untersuchen. Einzelne Prozesse
können nur untersucht werden, wenn ihre Analyse nicht zu aufwändig ist und so die
Durchführung des Screens erschwert.
2.1.1. Die Analyse vieler unterschiedlicher Prozesse erfordert zwei
parallele Screen-Ansätze und exakt definierte Zeitintervalle
Bereits während der Entwicklungsphase wurde klar, dass zur Durchführung von
iBeetle zumindest zwei voneinander unabhängige dsRNA-Injektionen nötig würden:
die Injektion von dsRNA in weibliche Puppen, zur Analyse embryonaler Effekte in
den Nachkommen der injizierten Tiere (Bucher et al., 2002) und larvale Injektionen
zur Untersuchung von postembryonalen Prozessen in den injizierten Tiere selbst
(Tomoyasu und Denell, 2004). Durch die pupalen Injektionen sollen diverse embryo-
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