Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...

Inhaltsverzeichnis
4.2.1. in situ Hybridisierung.........................................................................125
4.2.2. Antikörperproduktion und Immunohistochemische Färbungen..........126
4.2.3. Qualitative RT-PCR...........................................................................127
4.3. RNAi-Experimente.....................................................................................128
II. Kapitel: Entwicklung und Machbarkeitsstudie eines genomweiten RNAi-
Screen-Projekts in Tribolium.....................................................................131
1. Einleitung..........................................................................................................131
1.1. Tribolium als eigenständiges Modellsystem ..............................................131
1.2. Die Limitierungen des “candidate gene approach” ....................................134
1.3. RNAi-Screens als Alternative zu klassischen genetischen Ansätzen........136
1.4. iBeetle – ein genomweiter RNAi-Screen....................................................139
1.4.1. Das iBeetle Konzept..........................................................................139
1.4.2. „Enhancer trap“-Stämme erlauben die Detektion zusätzlicher
Phänotypen.......................................................................................141
1.4.3. Die iBeetle-Einzelprojekte und ihre Themen .....................................144
1.5. Ziele des zweiten Kapitels dieser Arbeit....................................................148
2. Ergebnisse........................................................................................................149
2.1. Wie kann ein genomweiter RNAi-Screen verwirklicht werden? .................149
2.1.1. Die Analyse vieler unterschiedlicher Prozesse erfordert zwei parallele
Screen-Ansätze und exakt definierte Zeitintervalle ...........................149
2.1.2. Arbeitsteilung und unterschiedliche Arbeitspläne erlauben optimale
Ressourcennutzung und hohen Durchsatz .......................................157
2.2. Das Screening-Schema ermöglicht die Identifizierung interessanter
Phänotypen mit hoher Sensitivität.............................................................164
2.3. Es konnten für nahezu alle Prozesse neue Kandidatengene identifiziert
werden ......................................................................................................170
2.3.1. Defekte der Ovario- oder Oogenese .................................................173
2.3.2. Defekte während der Embryonalentwicklung ....................................178
2.3.3. Defekte postembryonaler Prozesse ..................................................181
2.3.4. Bisher unbekannte Phänotypen der Positiv-Kontrollen .....................187
3. Diskussion ........................................................................................................189
3.1. Ein genomweiter RNAi-Screen in Tribolium ist technisch möglich.............189
3.1.1. Sowohl pupale als auch larvale RNAi sind im Screenmaßstab
durchführbar......................................................................................189