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II. 2. Ergebnisse
Ergebnisse der Positiv-Kontroll-Injektionen
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Für einen Teil der 30 als Positiv-Kontrollen verwendeten Gene war bereits be-
kannt, dass sowohl larvale als auch pupale RNAi zu einem detektierbaren Defekt
führt. So sollten durch die Positiv-Kontroll-dsRNAs 37 überprüfbare Phänotypen
produziert werden. Diese erwarteten Phänotypen umfassen Defekte in diversen
embryonalen und postembryonalen Prozessen. So erfüllen einige der Gene Aufga-
ben für die Segmentierung, die frühe Embryonalentwicklung, die Kopfentwicklung,
die Entwicklung der Extremitäten, für das Mesoderm, die Metamorphosekontrolle, die
Oogenese und auch allgemeine, essentielle Aufgaben für das Überleben der injizier-
ten Tiere (Tab. 8).
Die Auswertung der im Rahmen des Screening gemachten Beobachtungen er-
gab, dass nach nahezu jeder dieser 37 Injektionen mit erwarteten Phänotypen (pupal
und/oder larval) Defekte detektiert wurden. Allein in zwei Fällen, der pupalen Injekti-
on von spineless und piwi, konnte kein Effekt festgestellt werden.
Im Falle von spineless (Shippy et al., 2009; Toegel et al., 2009), wurde die Trans-
formation der larvalen Antennen zu Bein-ähnlichen Strukturen übersehen, obwohl sie
in den Präparaten vorhanden war. Die gleiche Transformation in Puppen bzw. adul-
ten Tieren nach larvaler RNAi wurde hingegen festgehalten. Dies ist also schlicht als
Fehler zu werten, wie sie bei einem solchen Prozedere zwangsläufig auftreten.
piwi-RNAi führte zwar nach larvaler, nicht aber nach pupaler RNA-Injektion zu
Sterilität und deutlichen Defekten des Ovars. Wahrscheinlich ist dies auf den Zeit-
punkt der Injektion zurückzuführen. piwi-dsRNA-Injektion in junge Puppen stört zwar
die Oogenese, für die Injektionen des Pilot-Screens wurden aber Tiere im letzen
Drittel der Puppenentwicklung (Schachtner, unveröffentlicht) verwendet, wo piwi-
RNAi möglicherweise keinen Effekt mehr hat (Trauner, 2009) und persönl. Mitteil.).
In den meisten Fällen war die Penetranz der Phänotypen mit über 80 % relativ
hoch (nicht gezeigt), und somit der Effekt leicht und zweifelsfrei detektierbar. Die
pupale Injektion von labial-dsRNA allerdings führte nur in ca. 30 % der präparierten
Kutikulae zu den erwarteten Veränderungen des Musters der Kopfborsten (Posnien
und Bucher, 2009). Dieser Phänotyp ist sehr subtil, weswegen die schwachen Defek-
te einer phänotypischen Serie im Rahmen des Screenings übersehen worden sein
könnten und somit die schwächere Penetranz erklären.
Nach larvaler Injektion von distalless-dsRNA wurden die typischen Veränderun-
gen der Extremitäten (Suzuki et al., 2009) in allen untersuchten Puppen festgestellt,