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II. 4. Material und Methoden
Bei Arbeitsschritten die im Pilotscreen auf andere Art und Weise durchgeführt
wurden, als es im Hauptscreen geplant oder angezeigt ist, sind die Varianten deutlich
mit (H) für Haupt- und (P) für Pilotscreen gekennzeichnet.
Bei Detektion eines Phänotyps werden höchstens fünf digitale Aufnahmen zur
Dokumentation festgehalten, in begründeten Ausnahmen (z.B. mehrere unabhängige
Defekte) eventuell auch mehr.
Inkubationen finden bei 32°C, ca. 60 % Luftfeuchtigkeit und Dauerlicht statt, In-
jektionen bei 23 °C.
4.2.1. Verwendete Stämme
Im Pilotscreen wurden für den pupalen Screenteil weibliche Tiere des pig19-
Stamms verwendet (Lorenzen et al., 2003). Dieser trägt einen eGFP-enhancer trap
in der Nähe eines actin-Gens (Lorenzen et al., 2007). Die Expression des Enhancer-
Traps im Großteil der somatischen Muskulatur der Tribolium-L1 Larve erlaubt die
Analyse embryonaler Muskeltypen am Fluoreszenzmikroskop.
Im Rahmen des larvalen Screenteils wurden Tiere des mD17-Stammes
(Pavlopoulos et al., 2004) injiziert. Der Enhancer-Trap eines minos-eGFP-Konstrukts
unbekannter Integrationsstelle führt zur Expression in der Thoraxmuskulatur adulter
Tiere (Pavlopoulos et al., 2004). Es stellte sich jedoch heraus, dass diese nur in
jugendlichen Tieren feststellbar, dort aber wegen der sich differenzierenden Kutikula
nur innerhalb eines kurzen Zeitfensters nach der Ecdysis durch äußere Inspektion
detektierbar ist. Die Expression in den sich entwickelnden Muskeln in pupalen Sta-
dien eignet sich hingegen zur Auswertung an einem Fluoreszenz-Stereomikroskop,
wobei erst ältere Puppen ab ca. 70 % des Puppenstadiums (bereits sklerotisierende
Mandibeln, Schachtner, nicht veröffentlicht) das volle Muster zeigen.
Für den Hauptscreen wird der pig19-Stamm um ein Konstrukt ergänzt werden,
das dsRedexpress-Expression im zentralen Nervensystem hervorruft (Bucher, nicht
veröffentlicht) und der mD17-Stamm wird einen dominanten Augenmarker auf dem
Y-Chromosom tragen (Lorenzen et al., nicht veröffentlicht), der die Unterscheidung
von männlichen und weiblichen Larven erlaubt.
Zur Verpaarung der Tiere werden während des Haupt-Screens Männchen des
black Stammes zur Verwendung kommen (Sokoloff et al., 1960), während im Vor-
screen der San-Bernardino(SB)-Stamm (Klingler, nicht publiziert) benutzt wurde. In
ersterem Stamm dient eine dunklere Kutikulafärbung, im zweiten die dunkle Augen-
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