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2.7.1. Tribolium brain-tumor
I. 2. Ergebnisse
In Tribolium ist ein eindeutiges brain-tumor-Ortholog (TC008260) identifizierbar.
Es liegt auf Komplementationsgruppe 2 und wird von HGSC und NCBI identisch
annotiert (GLEAN_08260 bzw. XM_965281). Die kodierende Sequenz liegt auf
einem einzigen Exon, was der Situation bei Drosophila entspricht (Arama et al.,
2000). 2448 bp kodieren für ein putatives 90,11 kDa Protein. Dieses enthält eindeutig
erkennbar beide B-box-Domänen (AS 124 bis 157 und 194 -227) und eine coiled-
coil-Domäne (AS 233 bis 372) in unterschiedlich hoher Konservierung, sowie die
sehr hoch konservierte NHL-Domäne am C-Terminus des Proteins (AS 541 bis 815,
Abb. 17). Innerhalb der NHL-Domäne beträgt die Zahl identischer Aminosäuren zu
Drosophila- bzw. Nasonia-BRAT 95 bzw 98 % (vgl. Abb. 17). Außerdem scheint das
Tribolium-Protein, wie auch das putative BRAT von Acyrtosiphon, im Aminoterminus
eine RING-Finger-Domäne (AS 61 bis 95) zu besitzen, wie sie in vielen anderen
NHL-Proteinen auftritt (Slack und Ruvkun, 1998), in den brat-Orthologen von Dro-
sophila und Nasonia im Lauf der Evolution aber offenbar verloren ging.
2.7.2. Expression von brat
In Drosophila ist keinerlei brain-tumor Expression vor Stadium 12 beschrieben
(Arama et al., 2000), obgleich zumindest BRAT-Protein natürlich schon in frühen
embryonalen Stadien vorhanden sein muss, um seine Funktion für die hb-Regulation
zu erfüllen. Ab dem späten Stadium 12 wird Drosophila brat in Zellen des sich entwi-
ckelnden ZNS und PNS exprimiert, was auch für das Tribolium-Ortholog zutrifft (Abb.
18, G,H). Tribolium-brat-mRNA findet sich allerdings bereits als maternale Kompo-
nente in der Oozyte und zeigt im weiteren Verlauf der frühen Embryogenese ein
dynamisches Muster. Zunächst wird die Expression an beiden Polen des Embryos
reduziert, so dass eine große zentrale Domäne entsteht (Abb. 18, B). Mit der
Differenzierung des Blastoderm beginnen allerdings die posterior liegenden Zellen
wieder brat-mRNA zu synthetisieren, während Zellen der Serosaanlage frei von
Expression bleiben (Abb. 18, C). brat-mRNA ist dann also in der gesamten Embryo-
nalanlage nachweisbar, zeigt allerdings im Bereich des anterioren Kopfes ein
erhöhtes Expressionsniveau (Abb. 18, C). Während der Bildung des Keimrudiments
wird die Expression nochmals in einem weiter posterior gelegenen, wahrscheinlich
segmentalen Streifen im Bereich der entstehenden thorakalen Segmente verstärkt
(nicht gezeigt). In späteren Stadien wird brat dann in Zellen des sich entwickelnden
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