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II. 2. Ergebnisse
bei 30°C inkubiert, um sicherzustellen, dass allen Embryonen genug Zeit gegeben
wird, sich bis zur Schlupfreife zu entwickeln und eine Kutikula auszubilden.
Zweite Ablage, Tag 11:
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Nach zwei Tagen ist die Eimenge ausreichend um die Auswertung der Muskula-
tur zu erlauben und der Entwicklungsabstand der Embryonen innerhalb der Ablage
dennoch nicht zu groß. Diese Eier werden wiederum bei 30°C inkubiert, und nach
drei Tagen anhand der Enhancer-trap-Expression auf Defekte der Muskulatur unter-
sucht (Tag 14).
Die Eimenge der Gelege wird im Vergleich zu Gelegen uninjizierter Tiere bzw.
der Gelege untereinander abgeschätzt und festgehalten. Dabei muss die Zahl der
lebenden Tiere pro Well mit beachtet werden. Im Fall reduzierter Eizahl werden die
Ovare von vier der injizierten Tiere präpariert und das Ergebnis dokumentiert. Wäh-
rend des Pilot-Screens wurden die Ovare für eine spätere Dokumentation am Fluo-
reszenzmikroskop fixiert und gefärbt.
Kutikulapräparate, Tag 13:
Die Embryonalentwicklung der ersten Ablage (ca. 3,5 Tage; Sokoloff, 1972), soll-
te abgeschlossen sein. Die an Tag 9 verwendeten Siebe erlauben geschlüpften
Larven durch das Sieb zu kriechen, wo sie aufgefangen werden. Die relative Menge
der geschlüpften Larven wird festgehalten, die zurückbleibenden Eier mit nicht-
geschlüpften Embryonen als Kutikulapräparate eingebettet und über Nacht inkubiert
(Bucher et al., 2002). Es verbleiben nur embryonal letale Phänotypen im Präparat,
wodurch die Auswertung vereinfacht wird. Die Präparation erlaubt die genaue Analy-
se kutikulärer Strukturen durch Fluoreszenz- oder Dunkelfeldmikroskopie und die
Lagerung der Präparate bis zur Auswertung oder der Reanalyse einzelner Aspekte.
Die Auswertung der Präparate richtet ihr Augenmerk auf diverse embryonale Pro-
zesse. Eine hohe Zahl an Eiern ohne Kutikula zeigt Effekte auf die Befruchtung oder
früh-embryonale Letalität an, die in Zusammenhang mit der frühen Achsenbildung
stehen könnte. Die Morphologie der Kutikula gibt unter anderem Hinweise auf Defek-
te während der Achsenbildung, der Entwicklung der extraembryonalen Membranen,
der Segmentierung, der Kopfentwicklung und der Beinentwicklung (s. 1.3).