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II. 2. Ergebnisse
durch vorgefertigte Textbausteine bzw. Auswahlmenüs die Vergleichbarkeit der
Ergebnisse der unterschiedlichen am Screen beteiligten Personen gewährleistet.
Pupale Injektionen:
Injektion, Tag 0:
Pro dsRNA werden acht weibliche Puppen des pig19-Stamms (s. 1.3; Lorenzen
et al., 2003) injiziert, und diese dann mit vier adulten Männchen verpaart. Die Zugabe
adulter Männchen stellt kein Problem in Hinsicht auf Kannibalismus dar (nicht ge-
zeigt; (Sokoloff, 1972). Die Tiere werden in einem Multiwellsystem gehalten, das für
die Haltung von Tribolium-Mutanten entwickelt wurde (Berghammer et al., 1999a).
Die Injektion von acht Puppen ist wegen der sehr guten Überlebensquoten der
pupalen RNAi ausreichend um später genügend Embryonen zur Auswertung zu
erhalten.
Pupale Analyse, Tag 3:
Der Erfolg der Injektionen wird kontrolliert. Nachdem zum Zeitpunkt der Injektion
schon der Großteil des ca. 5,5 Tage dauernden Puppenstadiums vorüber ist (bei
30°C; (Sokoloff, 1972), sind nun die überlebenden Tiere bereits geschlüpft. Es be-
steht die Möglichkeit, dass manche Injektionen bereits während des Puppenstadiums
zum Tod der injizierten Tiere führen, wobei die Ursache eine essentielle, allgemeine
Genfunktion oder eine Rolle für die Metamorphose sein könnte. Diese Unterschei-
dung ist in aller Regel nicht anhand der Morphologie zu treffen, weswegen diese
Effekte nur als potentieller Defekt der Metamorphose festgehalten werden können.
Erste Ablage, Tag 9:
Der Beginn der Eiablage unterliegt individueller Variabilität, erfolgt bei 30 °C aber
in der Regel vier Tage nach Schlupf (Sokoloff, 1972). Die Tiere hatten also ausrei-
chend Zeit die Imaginalhäutung zu durchlaufen und geschlechtsreif zu werden,
keines der bereits abgelegten Eier wird aber die Embryonalentwicklung vollständig
durchlaufen haben. So werden keine bereits geschlüpften Larven beim Absieben
verloren. Alle innerhalb der ersten Lebenstage abgelegten Eier werden in der ersten
Ablage aufgefangen und durch Kutikulapräparate ausgewertet (Tag 13). Die Eier
werden in geeigneten Sieben (s. 4.2.2; Berghammer et al., 1999a) noch vier Tage
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