Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...

Abb. 19: brain-tumor-RNAi führt zu embryonalen Defekten
I. 2. Ergebnisse
A, B Epifluoresenzaufnahmen der Kutikula schlupfreifer brat-RNAi-Larven. A zeigt eine
„whole-mount“ Aufnahme in leicht ventro-lateraler Sicht. Die Zahl der Abdominalsegmente ist
auf fünf reduziert, wobei dies nicht den stärksten beobachtbaren Phänotyp darstellt. Die
verbliebenen abdominalen Segmente erscheinen normal. Der Kopf ist nicht normal ausgebildet,
es tritt eine Ausstülpung des Stomodeums, eine Verkleinerung der Antennen und die
Deletion eines Labialpalpus auf. A’ zeigt einen vergrößerten Ausschnitt eines Beins mit
deformiertem Prätarsus. B zeigt die ventrale Ansicht des Kopfes einer anderen Larve. Es ist
eine Deletion des labialen Segments (Pfeil), eine Verkürzung der Antennen und eine leichte
Deformation der distalen Teile der Mandibel zu erkennen. (vergleiche Abb. 10 A)
C, D DIC-Aufnahmen vom Dotter befreiter, flachpräparierter, voll elongierter Keimstreifembryonen
in ventraler Ansicht, in-situ-Hybridisierung gegen wingless.
C zeigt den Wildtyp, D einen brat-RNAi-Embryo. Die Segmentierung brach offensichtlich
nach Bildung des neunten abdominalen wg-Streifens ab, die abdominalen Domänen sind
normal ausgeprägt. Die thorakalen Segmente zeigen unregelmäßige Domänen sowie verkleinerte,
deformierte Extremitätenknospen. Das labiale Segment ist deletiert (Pfeilspitze),
Die labralen Knospen sind reduziert.
E, F Hellfeldaufnahmen differenzierter Blastoderm-Embryonen in lateraler Ansicht, in-situ-
Hybridisierung gegen even-skipped.
E zeigt den Wildtyp, der erste doppelsegmentale eve-Streifen hat sich bereits in segmentale
Streifen aufgespalten (1a und b), Streifen zwei und drei sind deutlich erkennbar. F zeigt
einen brat-RNAi-Embryo. Es scheinen zwei segmentale eve-Streifen (Pfeilköpfe) und eine
größere (doppelsegmentale?) Domäne (weißer Pfeilkopf) angelegt zu sein, allerdings ist
deren Abstand zueinander deutlich verkleinert und ihre Form gestört. Somit scheint eine der
blastodermalen Domänen zu fehlen.
G, H Hoechst-33342 Kernfärbung der Embryonen in E, G. Serosa- und Embryonalanlage
sind klar zu erkennen (Pfeilköpfe). In H erschwert ein schlechtes Signal-zu-Hintergrund
Verhältnis die Auswertung. Die Zellkerne der Serosa liegen unregelmäßig verteilt. Die
Embryonalanlage ist deutlich verkleinert. G’ und H’ zeigen vergrößerte Ausschnitte eines
vergleichbaren lateralen Bereichs der Serosa aus G und H im gleichen Maßstab. Die Fehlverteilung
der Zellkerne nach brat-RNAi wird deutlich.
Anterior ist in allen Abbildungen links, außer in B, dort ist anterior oben. Der Größenstandard
weist 100 !m aus.
T1: erstes thorakales Segment, A“X“: x-tes abdominales Segment, Lr: Labrum/labrale Segmentanlage,
Ant: Antenne/antennale Anlage, Oc: Okulare Segmentanlage, Md: Mandibel/mandibuläre Segmentanlage,
Mx: Maxille/maxilläre Segmentanlage, Lb: Labium/labiale Segmentanlage, S: Serosaanlage,
E: Embryonalanlage
83