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I. 2. Ergebnisse
Abb. 22: pumilio spielt eine Rolle in der Extremitätenentwicklung
A Die Durchlichtaufnahme einer vom Rest des Embryos entfernten Beinanlage. pum in-situ-
Hybridisierung.
B Epifluoreszenzaufnahme der Hoechst-33342-Kernfärbung des gleiches Objekts. pum RNA
ist in einem Bereich unterhalb der ektodermalen Zellkerne lokalisiert (Pfeil). Vermutlich
befindet sich in diesem Bereich das Cytoplasma der ektodermalen Epithelzellen.
C Epifluoreszenzaufnahme des Beines einer schlupfreifen L1 Larve.
D Epifluoreszenzaufnahme des Beines einer pum-RNAi Larve. Die Podomere sind vorhanden,
sie sind allerdings im Vergleich zum Wildtyp deutlich verkürzt und erscheinen verdickt.
Cx: Coxa, Tr: Trochanter, Fe: Femur. Tt: Tibiotarsus, Pt: Prätarsus
2.8.4. Larvale RNAi gegen pumilio resultiert in einem Entwicklungs-
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block
Systemische RNAi in Tribolium kann nicht nur dazu verwendet werden, um emb-
ryonale Phänotypen zu generieren und Genfunktionen während der Embryogenese
zu untersuchen, sondern auch um postembryonale Prozesse, v.a. die Metamorphose
und die Bildung von adulten Strukturen zu analysieren (Tomoyasu und Denell, 2004;
Konopova und Jindra, 2007; 2008; Miller et al., 2008).
Nach Injektion von Larven (fünftes oder sechstes Larvenstadium) mit pumilio-
dsRNA kommt es zu einem Entwicklungsblock (Abb. 23). Während der normalen
Entwicklung durchlaufen die Tiere am Ende des siebten Larvenstadiums eine Phase
der Vorbereitung auf die Häutung zur Puppe. Als sogenannte Präpuppe sind die
Tiere bewegungslos und entwickeln die epidermalen pupalen bzw. adulten Anlagen,
die dann in der Puppe morphologisch deutlich zu Tage treten (äußere Metamorpho-
se; (Sokoloff, 1972; Dettner, 2003). Nach larvaler pum-RNAi sind die Tiere nicht in
der Lage, die Häutung zur Puppe korrekt zu durchlaufen und sterben als eine Art