Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...

II. 2. Ergebnisse
lichst effektiv zu gestalten und sinnvolle Arbeitsteilung zu realisieren. Die Injektionen
und die darauf folgenden Auswertungen sollen in jeder der beiden Phasen des
iBeetle-Screens von je vier Doktoranden bzw. Postdocs an den Screening-Centern
Göttingen und Erlangen durchgeführt werden. Außerdem werden die Screener von je
einer/einem technischen Assistenten und studentischen Hilfskräften unterstützt. Die
Arbeitsschritte dieser vier Screener müssen an den Screening-Centern so koordiniert
werden, dass: 1. während der Arbeit die höchstmöglichen Qualitätsstandards erreicht
werden. 2. möglichst viele Gene gescreent werden können, und 3. die Infrastruktur
der Screening-Center möglichst gut genutzt wird.
158
Die Grundlagen für das Erreichen dieser Ziele stellen die im vorherigen Abschnitt
beschriebenen Arbeitsabläufe dar. Wie diese in die Praxis umgesetzt werden kön-
nen, wurde durch Vorexperimente getestet und während der Durchführung des Pilot-
Screens verfeinert.
Um den Screenern eine möglichst hohe Routine für die Durchführung der Injekti-
onen und vor allem der Auswertungen und damit für das Erkennen und die Interpre-
tation interessanter Phänotypen zu ermöglichen, ist es sinnvoll, dass jeder Screener
nur pupale oder larvale Injektionen mit den nachfolgenden Auswertungen durchführt.
Die Zahl der in einem Durchgang injizierbaren dsRNAs wird dabei sowohl durch den
Zeitaufwand der Injektion selbst, als auch durch die nötige Zeit nachfolgender Ar-
beitsschritte begrenzt, da einige Auswertungen nicht auf mehrere Tage aufgeteilt
werden können. Die begrenzenden Schritte des pupalen Screens sind die Injektion
und die Auswertung der Lebendpräparate auf Muskeldefekte, die des larvalen
Screens vor allem die Injektion und die Begutachtung der pupalen Morphologie.
Anhand des in Vorexperimenten und dem Pilotscreen ermittelten Zeitaufwands der
einzelnen Arbeitsschritte (s. Anhang) konnten Zeitpläne für die Durchführung des
iBeetle-Screens erstellt werden (Abb. 27, Abb. 28, Abb. 29). Hierbei muss zunächst
beachtet werden, dass sich die einzelnen Arbeitsschritte aufeinanderfolgender
Durchgänge eines Screeners nicht überschneiden und trotzdem einen kontinuierli-
chen Arbeitsablauf erlauben. Außerdem muss vermieden werden dass sich die
Auswertungsphasen der beiden Screener die jeweils am pupalen oder larvalen
Screen arbeiten überlappen. Die Auswertungen im Rahmen des pupalen Screens
finden vor allem am Fluoreszenzmikroskop, die des larvalen Screens am hochver-
größernden Fluoreszenz-Stereomikroskop statt. Beides sind Geräte, die an den