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II. 1. Einleitung
1.5. Ziele des zweiten Kapitels dieser Arbeit
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Im Rahmen der Weiterentwicklung von Tribolium als Modellsystem der Insekten-
biologie stoßen die beteiligten Wissenschaftler immer häufiger auf Fragen, die durch
die Untersuchung von Orthologen zu Drosophila Genen nicht mehr zu beantworten
sind. Um diese Einschränkungen zu überwinden, haben deutsche Tribolium-
Wissenschaftler die Idee eines genomweiten RNAi-Screens entwickelt, der auf
möglichst breiter Ebene die Funktion aller Tribolium-Gene für unterschiedliche Ent-
wicklungsprozesse untersuchen soll.
Ziel dieser Arbeit war, die Durchführbarkeit eines solchen RNAi-Screens zu prü-
fen, ein mögliches Prozedere zu entwickeln und dieses im Rahmen eines Pilot-
Screens zu testen. Dabei sollte geklärt werden, ob das Vorhaben mit der angestreb-
ten thematischen Breite innerhalb der personellen und zeitlichen Rahmenbedingun-
gen durchführbar ist.
Zu diesem Zweck mussten die einzelnen Arbeitsschritte und Auswertungsmetho-
den entwickelt bzw. angepasst werden. Hierbei sollte untersucht werden, ob die
Verwendung der ausgewählten Marker-Expressions-Stämme („Enhancer-traps“)
möglich und sinnvoll ist, und ob für alle zu untersuchenden Prozesse geeignete
Analysemethoden gefunden werden können. Eine wichtige Frage war dabei, ob
diese Methoden und die Durchführung zweier unabhängiger Injektionen im Groß-
Maßstab realisierbar sind, um somit die Analyse embryonaler und postembryonaler
Prozesse zu erlauben.
Auf Basis dieser Vorarbeiten sollte ein Protokoll für die Durchführung des iBeetle-
Screens entworfen werden, das die Durchführung mit mehreren Personen gleichzei-
tig erlaubt. Dabei war es wichtig zu klären, ob die Untersuchung aller Tribolium-Gene
mit dem angestrebten Personalaufwand in der vorgebenen Zeitspanne erreichbar ist.
Schließlich sollte durch die Überprüfung dieses Protokolls im Rahmen eines Pi-
lotscreens gezeigt werden, dass alle Analysemethoden geeignet sind, die zu unter-
suchenden Defekte verlässlich zu detektieren. Mögliche Schwierigkeiten und Prob-
leme könnten so im Vorfeld des Hauptscreens erkannt und gelöst werden. Die De-
tektion neuer, bisher unbekannter Genfunktionen unterstreicht dabei die Effektivität
der erarbeiteten Methodik.