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II. 2. Ergebnisse
von RNAi-Effekten in unterschiedlichen Enwicklungsstadien und die Detektion inte-
ressanter Phänotypen mit hoher Sensitivität möglich sein wird.
Ergebnisse der dsRNAs unbekannter Funktion
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Außer den 30 dsRNAs der Positiv-Kontroll-Gene wurden im Rahmen des iBeetle-
Pilot-Screens 82 dsRNAs von zufällig aus einer embryonalen cDNA-Bank (Wolff et
al., 1995) amplifizierten Fragmenten synthetisiert und injiziert (s. 4.1). Es wurden
Fragmente mit einer Größe von ca. 450 bis 2000 bp verwendet und zunächst se-
quenziert. Doppelt vorhandene Fragmente, Fragmente ohne eindeutige Überein-
stimmung zu Sequenzen des Tribolium-Genoms und ribosomale (bis auf zwei) oder
mitochondriale Klone wurden verworfen. Die meisten der verwendeten cDNAs ließen
sich durch BLAST-Suchen automatisch annotierten, konservierten Tribolium-Genen
zuordnen, aber auch noch nicht annotierte Sequenzen (RNAs # 9, 57) und solche
ohne klare Homologien (RNAs # 14, 15, 27, 30, 63, 71, 85) waren darunter. Eine
vollständige Liste der injizierten Fragmente findet sich im Anhang.
Der Großteil der Injektionen dieser zufällig gewählten dsRNAs führte zu detek-
tierbaren Veränderungen im Rahmen des Pilot-Screens (Abb. 30). Nur 39 % der
injizierten dsRNAs hatten weder nach pupaler noch nach larvaler Injektion einen
feststellbaren Effekt, die korrespondierenden Gene spielen also scheinbar keine
wesentliche, entwicklungsrelevante Rolle. 33 % führten aber zu Störungen der unter-
suchten embryonalen oder postembryonalen Entwicklungsprozesse (Abb. 30). Hier-
bei hatten ungefähr ein Drittel dieser Fragmente sowohl Einfluss auf embryonale als
auch postembryonale Prozesse, was wiederum illustriert, dass viele Entwicklungsge-
ne mehrere Aufgaben erfüllen (Miklos und Rubin, 1996).
Fast ein Drittel aller Fragmente führte außerdem zu aus iBeetle-Sicht unspezifi-
scher Letalität der injizierten Tiere (Abb. 30). Als solche unspezifische Letalität be-
zeichne ich hier den Tod der injizierten Tiere während später larvaler Stadien nach
larvaler Injektion oder als junge adulte Tiere nach pupaler Injektion ohne erkennba-
ren, interessanten Phänotyp. Fragmente die diesen Effekt hervorrufen, repräsentie-
ren vermutlich „house keeping“-Gene oder Gene die für Prozesse wichtig sind, die
nicht im Fokus von iBeetle stehen. Der größte Teil dieser Gene (68 %) führt erwar-
tungsgemäß sowohl nach larvaler als auch nach pupaler Injektion zum Tod. In diese
Gruppe fallen beispielsweise auch die beiden injizierten Fragmente ribosomaler
Gene, was bestätigt, dass hier von allgemein essentiellen Genfunktionen ausgegan-