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II. 3. Diskussion
ist, einen spezifischen Phänotyp zu überdecken. Verursacht der Verlust des eigentli-
chen Zielgens aber keinen sichtbaren Defekt, wäre es möglich, dass sich die „off
target“-Sequenz auswirkt. In Drosophila RNAi-Screens wurden solche „off target“-
Effekte tatsächlich beschrieben (Ma et al., 2006), es ist somit wahrscheinlich, dass
sie auch in Tribolium auftreten. Um diese Möglichkeit bei der Auswahl von Kandida-
tengenen mit interessanten Phänotypen auszuschließen, sieht die Planung des
iBeetle-Projekts vor, dass für alle Teilprojekte zunächst eine Anzahl an potentiellen
Kandidaten mit nicht überlappenden RNA-Fragmenten auf die Spezifität des Phäno-
typs hin überprüft wird. Sollten „off target“-Effekte auftreten, wird gegebenenfalls
versucht, das eigentlich für den Phänotyp verantwortliche Gen zu identifizieren.
Dieses Vorgehen wird somit auch erlauben, das Auftreten solcher „off target“-Effekte
in Tribolium zu quantifizieren.
Zusammenfassend wird klar, dass der iBeetle-Pilot-Screen die Effektivität eines
Tribolium-RNAi-Screen deutlich macht, obgleich die Zahl an bisher erhaltenen letalen
Effekten möglicherweise etwas höher liegt, als im Hauptscreen zu erwarten.
3.2.5. Die Auswertung und Kategorisierung der Phänotypen ist von
größter Bedeutung für den Erfolg des Screens
Es liegt auf der Hand, dass neben einer effizienten Durchführung die Auswertung
der Experimente und der gesammelten Daten den kritischen Punkt für den Erfolg und
die Nutzbarkeit eines Screen-Projekts darstellt. Dabei kommt es vor allem darauf an
eine Balance zwischen Sensitivität und der Rate an falsch-positiven Ergebnissen zu
finden.
Der erste Schritt im iBeetle-Screening-Ablauf, der diese Balance beeinflusst, ist
die Auswertung der Präparate im Rahmen der experimentellen Analysen. Hier ist es
wichtig, dass den Screenern klare Vorgaben an die Hand gegeben werden, welche
Aspekte bei der Auswertung zu beachten sind und wie ein stereotypes Vorgehen
eingehalten werden kann um die höchstmögliche Effizienz und Sensitivität zu errei-
chen. Hierfür sollen die Screener in einem Einführungslehrgang geschult werden,
und außerdem sollen detaillierte Screening-Tafeln der zu untersuchenden Strukturen
entworfen werden, die auch ein bestimmtes Vorgehen bei der Auswertung der Prä-
parate vorgeben (s. 4.2). Um bereits an diesem Punkt die Zahl an falsch positiven
Ergebnissen zu reduzieren, ist es nötig, bei den Screenern ein Bewusstsein für die
Art und die Häufigkeit natürlich auftretender Entwicklungsdefekte zu schaffen. Dieser
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