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II. 2. Ergebnisse
nale Musterbildungsprozesse (Achsenbildung, Segmentierung, Kopf- und Beinent-
wicklung usw.) anhand von Kutikulapräparationen, die Entwicklung der Muskulatur in
lebenden Embryonen sowie die Eiproduktion und eventuelle Oogenese-Defekte
untersucht werden. Nach den larvalen Injektionen hingegen liegt das Augenmerk auf
der Untersuchung von unterschiedlichen Prozessen während der Metamorphose, der
Entwicklung des Ovars sowie der Stinkdrüsen.
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Es ist nicht möglich diese beiden Komplexe zur Vereinfachung des Screens
durch einen einzigen Ansatz abzudecken. Pupale Injektion eignet sich zwar sehr gut
zur Analyse der Embryonalentwicklung in den Nachkommen der injizierten Tiere, die
Dauer des RNAi-Effekts (Bucher et al., 2002) reicht aber sicher nicht aus, um auch
einen Effekt auf die Metamorphose der Nachkommen zu entfalten. Außerdem ver-
hindern Defekte während der Embryogenese die Auswertung möglicher Effekte auf
spätere Prozesse. Um Vorgänge während der Metamorphose zu untersuchen muss
also larval injiziert werden. Diese Injektionen eignen sich wiederum nicht für die
zusätzliche Analyse der Embryonalentwicklung. Der zeitliche Abstand zwischen
Injektion und der Geschlechtsreife der injizierten Tiere ist hier zu groß um noch RNA-
Interferenz optimaler Effizienz zu induzieren.
Um eine ökonomische Durchführung des Screens zu gewährleisten, muss die
Anzahl der Injektionen pro Gen auf diese beiden beschränkt werden, wobei aber
dennoch alle relevanten Prozesse untersucht werden sollen. Somit ist es nötig aus
einer Injektion möglichst viel Information zu erhalten, also mehrere Analysen mit den
gleichen Tieren durchzuführen. Ebenso muss vorsichtig abgewogen werden, ob der
praktische Aufwand der Analyse eines Prozesses vertretbar ist und in sinnvollem
Verhältnis zum Nutzen, also dem erwarteten Kenntnisgewinn steht.
Auf dieser Grundlage habe ich zunächst ein Konzept für die Durchführung des
Screens erstellt (Abb. 26). Hierfür wurden beide Injektionen mit den darauf folgenden
Auswertungen als voneinander unabhängige Experimente betrachtet. Um die Analy-
se aller zu untersuchenden Prozesse zu erlauben, müssen während des pupalen
Screen-Teils zumindest vier, und in der Folge der larvalen Injektionen fünf Auswer-
tungsschritte erfolgen (eine genauere Beschreibung dieser Schritte folgt). Diese
umfassen im pupalen Screenteil die Begutachtung der injizierten Tiere (Kontrolle des
Injektionserfolgs und potentielle Metamorphosedefekte), die Anfertigung von Kutiku-
lapräparaten und Präparaten der larvalen Muskulatur (embryonale Defekte) und die
Auswertung der Legeleistung (Defekte der Oogenese). Nach den larvalen Injektionen