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II. 1. Einleitung
Augen und im zentralen Nervensystem führt. Die Detektion der Expression wird
durch die Verwendung eines genetischen Hintergrundes mit einer Mutation des
vermillion-Gens vereinfacht, die zu einem Verlust der Augenpigmentierung führt
(Lorenzen et al., 2002). Diese Marker-Expression erlaubt die einfache Feststellung
von Defekten der Augenentwicklung in embryonalen und vor allem in pupalen Sta-
dien. Je nach Integrationsort kann dieses Konstrukt außerdem von benachbarten
endogenen Enhancern aktiviert werden und zu gewebespezifischer Expression
führen.
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Die pupalen Injektionen werden mit dem Stamm pig19 durchgeführt. Dieser trägt
eine Insertion des Enhancer-Trap-Konstrukts in einem aktin-Gen, was zu eGFP-
Expression im Großteil der Körpermuskulatur der schlupfreifen Larve führt (Lorenzen
et al., 2003; Lorenzen et al., 2007). Ventrale, laterale und dorsale Muskulatur in
Thorax und Abdomen sind ebenso wie die Muskulatur des Kopfes deutlich zu erken-
nen (Abb. 25), und erlauben die Detektion von globalen Defekten dieser Muskel-
gruppen. Auch die Muskulatur der larvalen Beine ist deutlich erkennbar und wird ein
Schwerpunkt der Auswertung sein (Abb. 25, 1.4.3).
Diesem genetischen Hintergrund soll für die Durchführung von iBeetle noch ein
rot-fluoreszierender Marker im gesamten zentralen Nervensystem hinzugefügt wer-
den, der die Detektion von neuralen Defekten erlauben soll.
Für die larvalen Injektionen wird ein Stamm verwendet, der eine nicht lokalisierte
Insertion eines minos-3xP3-eGFP Konstrukts trägt (Pavlopoulos et al., 2004), die zur
GFP-Expression in Teilen der sich entwickelnden Muskulatur des dritten Thorakal-
segments pupaler Stadien führt (mD17, Abb. 25). Dieses metathorakale Muster
entwickelt sich in der Präpuppe und Puppe und bleibt auch in jungen adulten Käfern
noch sichtbar bevor es dann zurückgeht. Die Enhancer-trap-Expression erlaubt somit
die Analyse von Defekten während der Entwicklung der thorakalen adulten Muskula-
tur. Für den iBeetle-Screen soll diesem Stamm noch ein Konstrukt hinzugefügt
werden, das eine Y-chromosomale Insertion eines dominanten Augenpigmentmar-
kers trägt (Lorenzen, nicht veröffentlicht) und so durch die vorhandene Augenfärbung
eine einfache Unterscheidung von männlichen und weiblichen Larven zulässt.