Anais da 27º Semana Científica - Hospital de Clínicas de Porto Alegre

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Revista HCPA 2007; 27 (Supl.1)
DETERMINAÇÃO DO SEXO FETAL ATRAVÉS DE UMA AMOSTRA DE SANGUE MATERNO.
HUGO BOCK; ROBERTO GIUGLIANI, MARIA LUIZA SARAIVA-PEREIRA
A presença de células fetais nucleadas na corrente sangüínea da mãe já foi comprovada por vários estudos, mas o isolamento
dessas células é trabalhoso e demorado. Com o avanço das tecnologias em biologia molecular, principalmente com a
popularização da PCR, que detecta até uma única molécula de DNA em uma amostra, foi possível comprovar a existência de
DNA fetal livre no plasma materno. A importância desse achado está ligado principalmente a identificação precoce do sexo fetal
em famílias em risco para doenças genéticas de herança ligada ao sexo, como a hemofilia, a DMD, a síndrome de Menkes, entre
outras. Este trabalho tem como objetivo introduzir uma metodologia de sexagem fetal pela análise de DNA obtido do plasma
materno. A amostra foi composta por 64 mulheres grávidas entre a 5ª e a 25ª semana de gestação. Desses indivíduos foi coletada
uma amostra de 5 mL de sangue periférico em tubo com EDTA como anticoagulante, o plasma foi separado e o DNA nele
circulante foi isolado utilizando-se um kit comercial. A amplificação do DNA foi feita por PCR em tempo real utilizando o
sistema TaqMan® (Applied Biosystems), de uma região específica do cromossomo Y e de uma outra região do genoma humano
como controle interno da reação. Através dessa metodologia, foram encontrados 37 (57,8%) amostras do sexo masculino e 27
(42,2%) amostras do sexo feminino. No grupo de amostras femininas, 3 (4,7%) apresentaram resultado falso negativo, sendo que
2 (3,1%) dessas amostras eram proveniente de mulheres com menos de 8 semanas de gestação. A metodologia desenvolvida e
testada se mostrou foi eficiente e adequada para ser introduzida como importante ferramenta de uso clínico, visto que reduz a
necessidade de métodos invasivos para diagnóstico de doenças no período pré-natal (Apoio: CNPq).
CHARACTERIZATION OF AT RISK PATIENTS FOR HEREDITARY BREAST AND OVARIAN CANCER CONSIDERING
PRESENCE AND FREQUENCY OF GENIC REARRANGEMENTS IN BRCA1
INGRID PETRONI EWALD; EDENIR INÊZ PALMERO, PATRICIA IZETTI LISBOA RIBEIRO, CARLOS ALBERTO
MOREIRA FILHO , DANIELLE RENZONI , MARIA ISABEL WADDINGTON ACHATZ , FERNANDO REGLA VARGAS ,
MIGUEL MOREIRA , ROBERTO GIUGLIANI , PATRICIA ASHTON-PROLLA .
Introduction: In the world-wide context, breast cancer is the most common cancer and it is the first tumor in frequency among
women. In Brazil, it represents the first cause of death in brazilian women of all ages. In relation to the Hereditary Breast and
Ovarian Cancer (HBOC Syndrome) (5-10% of all breast cancer), BRCA-1 and BRCA-2 are the main genes involved. Families
with clinical criteria of HBOC but with negative BRCA1/2 mutations should be tested for large gene rearrangements since these
abnormalities seems to be responsible for, at least, 10% of all cases. Amongst these rearrangements, large deletions and/or
duplications were recently associated to HBOC. Objectives: To verify the frequency of gene rearrangements in BRCA1 in
brazilian individuals with the clinical diagnosis of HBOC comparing two different techniques. Materials and Methods: Forty
patients with breast or ovarian cancer, fulfilling the ASCO criteria and/or with a mutation probability of at least 30% by pedegree
analysis and with the use of known methods (Myriad Mutation Prevalence Tables and the Penn II model) were included. Long-
Range PCR and MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) were used to detect gene rearrangements. Results
and Conclusions: Currently, 20 patients have been analysed. Additional results will be presented.
TERMOESTABILIDADE DA ENZIMA QUITOTRIOSIDASE: COMPARAÇÃO ENTRE PACIENTES COM A DOENÇA DE
GAUCHER COM E SEM TRATAMENTO DE REPOSIÇÃO ENZIMÁTICA E INDIVÍDUOS NORMAIS
ALESSANDRO WAJNER; MICHELIN K.; ANDRADE C.V.; BURIN M.G.; PIRES R.F.; GIUGLIANI R. AND COELHO J.C.
Introdução: A enzima Quitotriosidase (QT) faz parte da família das glicosilhidrolases e tem função de degradação de quitina. A
atividade da QT é freqüentemente muito aumentada em plasma de pacientes com a Doença de Gaucher. Além disso, também se
encontra um aumento moderado na atividade da QT em pacientes com Doença de Niemann-Pick, Gangliosidose-GM1 e Doença
de Krabbe. O objetivo do trabalho foi investigar a termoestabilidade da QT em indivíduos normais e em pacientes com a Doença
de Gaucher com e sem tratamento de reposição enzimática (TRE). Material e Métodos: foi determinado através de um método
fluorimétrico a atividade e a termoestabilidade da QT em plasma de controles, pacientes com a Doença de Gaucher com TRE
(GE) e pacientes com a doença de Gaucher sem TRE (DG). Resultados: A atividade da QT no grupo DG e GE foi,
respectivamente, 51 vezes e 53 vezes mais alta comparado à atividade de indivíduos normais. No grupo DG observou-se uma
maior estabilidade da enzima ao calor quando incubada por 10, 15 e 25 minutos a 60oC, em comparação à enzima do grupo GE e
do grupo controle. Os resultados mostraram que a curva de termoestabilidade do grupo GE foi semelhante àquela de indivíduos
normais nos minutos finais (10, 15 e 25 minutos) de incubação. Estudos cinéticos da enzima quitotriosidase podem auxiliar para
um melhor entendimento da patofisiologia da Doença de Gaucher.
IDENTIFICAÇÃO DE MUTAÇÕES NO GENE DA ARILSULFATASE A ATRAVÉS DE PCR EM TEMPO REAL
ETIENE AQUINO CARPES; HUGO BOCK; ROBERTO GIUGLIANI; MARIA LUIZA SARAIVA PEREIRA
A arilsulfatase A (ASA), enzima lisossômica que catalisa o primeiro passo da degradação do cerebrosídeo sulfato, é codificada
por um gene localizado no cromossomo 22, o qual é formado por oito exons. Alterações na seqüência normal podem estar
associadas a uma doença hereditária denominada leucodistrofia metacromática (LDM), caracterizada pelo acúmulo de
cerebrosídeo sulfato nos tecidos, ou à pseudodeficiência de ASA (PD-ASA). As mutações 459+1G>A e P426L são associadas à
LDM enquanto as mutações N350S e 1524+95A>G à PD-ASA. O objetivo deste trabalho foi introduzir e validar uma
metodologia baseada em PCR em tempo real para identificação destas mutações. Nesse estudo, foram avaliados (i) um grupo
controle composto por 62 indivíduos e (ii) um grupo teste composto por amostras de DNA de 200 indivíduos normais, sadios e
sem suspeita clínica de LDM. O DNA foi isolado a partir de uma amostra de sangue com o kit GFX Genomic Blood DNA
Purification (GE Healthcare) e quantificado pelo método fluorimétrico. As mutações foram analisadas pelo sistema TaqMan no
equipamento ABI 7500 PCR System (Applied Biosystems). Os primers e as sondas foram desenhados no programa Primer
Express versão 2.0 (Applied Biosystems). A validação do método foi realizada através da confirmação dos resultados no grupo