Anais da 27º Semana Científica - Hospital de Clínicas de Porto Alegre

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Revista HCPA 2007; 27 (Supl.1)
controle. Após a validação, o grupo teste foi analisado e as mutações 459+1G>A e P426L não foram encontradas nos 400 alelos
analisados. A metodologia se mostrou sensível e adequada para ser utilizada em larga escala. Os resultados obtidos até o momento
confirmam a suspeita de que a LDM é uma doença rara no nosso meio. Por fim, a validação dessa metodologia é de grande
utilidade para o diagnóstico complementar de LDM e de PD-ASA (Apoio financeiro: FAPERGS e CNPq).
ANÁLISE DE REPETIÇÕES CAG NOS GENES SCA1, SCA2, SCA3 E SCA6 EM PACIENTES COM SUSPEITA CLÍNICA
DE ATAXIA ESPINOCEREBELAR
VANESSA ERICHSEN EMMEL; ALEXIS TROTT; LAURA BANNACH JARDIM; MARIA LUIZA SARAIVA-PEREIRA
As ataxias espinocerebelares (SCAs) são doenças neurodegenerativas com herança autossômica dominante que apresentam
grande heterogeneidade clínica e genética. O diagnóstico é realizado pela detecção da mutação no gene causador, que, na sua
maioria, é uma expansão de repetições trinucleotídicas CAG. O objetivo deste estudo foi analisar os polimorfismos de repetições
trinucleotídicas nos genes associados as SCAs tipo 1, tipo 2, tipo 3 e tipo 6 através de PCR-multiplex e eletroforese capilar,
visando a melhoria do diagnóstico molecular e a determinação da distribuição das regiões polimórficas nos alelos normais. As
análises foram realizadas em 123 pacientes não-aparentados que apresentavam sintomas de ataxia. Nessa amostra, foram
identificados 9 pacientes com SCA2, 39 pacientes com SCA3 e 2 pacientes com SCA6. Não encontramos amostras com uma
expansão CAG no gene SCA1. Os polimorfismos de cada loci foram estudados nos cromossomos normais desses pacientes
(n=209-248). A freqüência dos alelos normais grandes no locus SCA1 (>32 repetições CAG) foi estabelecida em 0,05 e no locus
SCA2 (>22 repetições CAG) foi 0,11, enquanto que no locus SCA3 (alelos >28 repetições) a freqüência foi 0,11. A freqüência de
alelos normais grandes para o locus SCA6 (>13 repetições) foi 0,04. Concluindo, este estudo proporcionou a primeira análise
detalhada da distribuição de repetições CAG nos loci SCA1, SCA2, SCA3 e SCA6 por amplificação multiplex e eletroforese
capilar em pacientes brasileiros. A freqüência dos alelos normais grandes nos genes SCA3 e SCA6 nessa amostra reflete a
prevalência destas duas doenças na nossa população, concordando com a hipótese que alelos patogênicos podem ser originados
pela expansão de alelos normais grandes (Apoio Financeiro: CNPq, FIPE-HCPA).
INFLUÊNCIA DA COMPOSIÇÃO DE FOSFOLIPÍDEOS SOBRE AS PROPRIEDADES DOS COMPLEXOS FORMADOS
ENTRE NANOEMULSÕES CATIÔNICAS E PDNA
MICHELLE FRAGA; MANOELA LAUX; BERNARDO ZANDONÁ; GABRIELLA REJANE DOS SANTOS; URSULA
MATTE; HELDER TEIXEIRA
Introdução: Nanoemulsões catiônicas (NEC) têm sido recentemente propostas como sistemas carreadores de DNA. Objetivo: O
presente trabalho teve por objetivo avaliar a influência de diferentes fosfolipídeos sobre propriedades dos complexos formados
entre NEC e pDNA (pTracerTM-CMV2). Metodologia: NEC constituídas de triglicerídeos de cadeia média, estearilamina,
lecitina de gema de ovo ou fosfolipídeos isolados (DSPC, DOPC, DSPE ou DOPE), glicerol e água foram preparadas através do
procedimento de emulsificação espontânea. A complexação do pDNA com as nanoemulsões catiônicas foi avaliada através do
ensaio de retenção em gel de agarose por eletroforese. A citotoxicidade das nanoemulsões e dos complexos com o pDNA sobre
células Hep G2 foi avaliada através do ensaio de MTT. Também foi realizado um estudo preliminar de transferência gênica
utilizando a técnica de PCR em tempo real. Resultados: Independente do tipo de fosfolipídeo empregado, as NEC apresentaram
diâmetro de gotícula e potencial zeta de cerca de 250 nm e +50 mV, respectivamente. A associação das NEC ao pDNA foi total
quando o complexo apresentou uma relação de cargas [+/-] ³ 1,0. A adição de quantidades crescentes das NEC, conduz a uma
toxicidade progressiva sobre as células. Dentre as formulações estudadas, aquelas estabilizadas pelos fosfolipídeos DSPC e DSPE
foram marcadamente menos tóxicas que as formulações obtidas com lecitina, DOPC e DOPE. Essa mesma tendência foi
detectada para os complexos formados com o pDNA. Dentre as diferentes formulações testadas, a maior quantidade de DNA de
GFP detectada parece ser para a formulação contendo DSPC. Conclusão: O conjunto de resultados ilustra as potencialidades de
uso das NEC desenvolvidas como reagentes de transfecção de pDNA em células Hep G2.
PADRONIZAÇÃO DA TÉCNICA DA ARILSULFATASE A EM TECIDOS DE CAMUNDONGOS PARA POSTERIOR
APLICAÇÃO COM PESQUISA DE TERAPIA GÊNICA
BRUNA DOLEYS CARDOSO; MAIRA GREFF BURIN; VALESKA LIZZI LAGRANHA; MARIA LUÍSA SARAIVA
PEREIRA; URSULA MATTE; ROBERTO GIUGLIANI
INTRODUÇÃO: A Leucodistrofia metacromática (LDM) é uma doença autossômica recessiva caracterizada pelo acúmulo de
sulfatídio principalmente no sistema nervoso central (SNC). A deficiência da enzima arilsulfatase A (ASA), é a causa principal da
LDM e essa enzima está envolvida na degradação de glicolipídios sulfatados. Até o momento, não foi encontrada terapia eficaz
para LDM já que o principal alvo no tratamento é o SNC, e a presença da barreira hemato-encefálica dificulta o acesso desta
enzima. OBJETIVOS: Padronizar a técnica para homogeneização de tecido, dosagem de proteína e medida da atividade da ASA
em diversos órgãos de camundongos sadios, além de estabelecer os valores de referência da ASA e comparar as atividades nos
órgãos analisados. METODOLOGIA: Dez camundongos foram sacrificados. Baço, fígado, rim, bexiga, cérebro e cerebelo foram
coletados, homogeneizados, sonicados e centrifugados. Foi então realizada a dosagem de proteínas e a medida da atividade da
ASA. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os valores de referência (em ηmol/h/mg de proteína) obtidos foram: 12-26 para o baço,
15-24 para o fígado, 22-45 para o rim, 13-29 para o cérebro, 15-24 para o cerebelo e 8,1-19 para a bexiga. Foi possível perceber
que há diferença estatisticamente significativa entre as atividades da ASA na bexiga e no rim quando comparadas com os demais
órgãos. A menor atividade encontrada na bexiga parece ser justificada pelas diferenças na tradução da enzima, e também pela
dificuldade de homogeneização deste órgão; já a maior atividade encontrada no rim parece ser devido ao fato de que é um órgão
que produz mais sulfatídios e também por degradar outro substrato. CONCLUSÃO: Foi possível padronizar a técnica e
determinar valores de referência para a atividade da ASA nos órgãos avaliados. Esses resultados serão utilizados em estudos com
terapia gênica testando a eficácia da administração de células encapsuladas superexpressando ASA no cérebro.