Anais da 27º Semana Científica - Hospital de Clínicas de Porto Alegre

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Revista HCPA 2007; 27 (Supl.1)
CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DA HEMOGLOBINA S
SIMONE MARTINS DE CASTRO; ANA PAULA SANTIN; SANDRINE COMPARSI WAGNER, CARINA ZALESKI,
VANUSA MANFREDINI, MARA BENFATO.
A hemoglobina S (HbS) resulta da troca de nucleotídeo (GAGàGTG) no códon 6 do gene da globina, levando à substituição do
ácido glutâmico por valina na cadeia beta da globina. A hemoglobina mutante possui propriedades físico-químicas bastante
diferentes da hemoglobina normal, devido à perda de duas cargas elétricas. Apesar de ser possível a diferenciação pelos métodos
eletroforéticos, algumas variantes apresentam comportamento eletroforético similar, por possuir propriedades bioquímicas muito
semelhantes, como é o caso das hemoglobinas S e D, dificultando o correto diagnóstico. O presente estudo objetivou a
padronização da técnica de PCR para a caracterização molecular da hemoglobina S. Para as análises moleculares, o DNA foi
extraído pelo método de Miller e col.,1988 e o éxon 1 do gene da globina beta foi amplificado, através da reação em cadeia da
polimerase. O produto amplificado de 382 pb foi digerido com a enzima de restrição Dde I, e o produto da digestão submetido à
eletroforese em gel de agarose 1,5%. Foram analisadas 61 amostras de sangue periférico de pacientes procedentes do Laboratório
de Hemoglobinopatias da Faculdade de Farmácia-UFRGS com os seguintes perfis hemoglobínicos: Hb AS (37), Hb SS (16), Hb
SC (6), Hb SD (1) e Hb AA(1). A mutação no códon 6, elimina um sítio de restrição da Dde I, assim após a digestão o alelo
normal gera três fragmentos de 78, 201 e 88 pb, enquanto o alelo mutante gera dois, um de 288 e outro de 87 pb. Cada
metodologia utilizada para a identificação das variantes de hemoglobinas apresenta limitações. Desse modo, faz-se necessária a
utilização de técnicas clássicas associadas a estudos moleculares para a identificação acurada dessas hemoglobinas anormais,
fornecendo suporte pra um diagnóstico correto e tratamento eficaz.
AVALIAÇÃO DO USO DE CÉLULAS DE MEDULA EM MODELO ANIMAL DE LESÃO HEPÁTICA AGUDA INDUZIDA
POR PARACETAMOL
MARIA CRISTINA RAMOS BELARDINELLI; PEREIRA,F; BALDO,G; KIELING, CO; SILVEIRA,TR; DUARTE,ME;
MEURER,L; GIUGLIANI,R; MATTE,U.
Introdução: A Falência Hepática Fulminante (FHF) é uma grave complicação que acomete vários erros inatos do metabolismo
(EIM), atingindo especialmente as crianças e neonatos. FHF é caracterizada por uma perda rápida da função hepática, com alta
taxa de mortalidade e morbidade. Diversos estudos ocorrem devido a danos causados principalmente por medicamentos, entre eles
o paracetamol, sendo o transplante de fígado necessário para estes pacientes. Trabalhos têm mostrado a capacidade das células de
medula adultas de se diferenciar em hepatócitos, sugerindo seu uso para reverter quadros de lesão hepática. Objetivos: No estudo
atual nós testamos o uso da fração mononuclear de células derivadas da medula, melhorar a sobrevida do modelo de
acetaminofem (APAP) induzir FLF nos ratos. Materiais e Métodos: Fêmeas foram submetidas a uma FHF através da
administração intraperitoneal de dose única de paracetamol (1g/kg), em animais submetidos a um tratamento prévio com
fenobarbital. Células foram extraídas da medula de ratos machos e a fração mononuclear foi separada por gradiente de FICOLL,
corada com DAPI e injetada na veia porta de 39 animais 24 horas após a lesão numa concentração de 1x107 células/mL. Como
grupo controle 24 ratas receberam o mesmo volume de solução salina (grupo sham). Resultados: O grupo sham apresentou uma
sobrevida de 33%, enquanto o grupo tratado 64% no período de 72 horas pós lesão. A análise do tecido hepático do grupo tratado
apresentou menores características histológicas de lesão hepática e maior índice mitótico, revelando também presença de células
fluorescentes, DAPI positivas. A sobrevida 72h após a lesão hepática foi de 33% para o grupo sham e 64% para o grupo tratado
com células de medula. Conclusões: A eficácia e segurança deste procedimento sugere a utilização de células de medula como
uma possível alternativa terapêutica para o tratamento de falência hepática aguda.
MONITORAMENTO DO NÍVEL SÉRICO DE TRANSFORMING GROWTH FACTOR BETA 1 (TGF BETA 1) EM UM
MODELO ANIMAL DE FIBROGÊNESE HEPÁTICA
FERNANDA DOS SANTOS DE OLIVEIRA; MARIAH RESENDE, CAIO MELO, CAROLINA URIBE, URULA MATTE,
THEMIS REVERBEL DA SILVEIRA
O Fator de Crescimento Transformante (Transforming Growth Factor Beta 1, TGF Beta 1) é uma citocina envolvida em processos
patogênicos cujo desfecho envolva fibrose. Muitos estudos apontam esta molécula como sendo uma peça chave no
desenvolvimento de fibrose hepática. O objetivo deste estudo foi monitorar os níveis séricos de TGF Beta 1 em um modelo
animal de fibrogênese hepática por Tetracloreto de Carbono (CCl4). Ratos Wistar de 2 meses de idade e pesando entre 250 e 300g
foram submetidos ao modelo de fibrose hepática por ingestão de CCl4 tetracloreto de carbono na proporção de ml/kg em presença
de restrição alimentar ( 16,5 g de ração/rato/dia) e fenobarbital (350mg/L) na água de beber, que foi oferecida ad libitum. Os
animais foram sacrificados após 6, 10 e 12 semanas para coleta de sangue e tecido. Os níveis séricos de TGF Beta 1 foram
quantificados por ELISA, utilizando kit comercial. Os fígados foram analisados por coloração de hematoxilina-eosina. Foi
observado aumento de TGF Beta 1 na sexta e décima semana do modelo experimental. Na décima segunda semana, os níveis de
TGF Beta 1 diminuíram, aproximando-se dos valores normais, apesar de os animais apresentarem cirrose bem estabelecida à
análise histológica. Estes resultados podem ser explicados pelo fato de que a cirrose leva à redução do número de células que
compõem o parênquima hepático e secretam essa citocina.
REVERSION OF ACTIVATED PHENOTYPE IN GRX CELLS USING RNAI FOR TGF-BETA1: PRELIMINARY RESULTS
FERNANDA DOS SANTOS DE OLIVEIRA; URIBE C, REZENDE M, GIUGLIANI R, MEURER L, SILVEIRA TR, MATTE
U
TGF-Beta is a cytokine involved in cellular proliferation and differentiation. Its pro-fibrogenic role in liver is well established in
the priming and maintenance of the activated phenotype hepatic stellate cells. In this study the cell line GRX was used as model
for activated hepatic stellate cells. To inhibit TGF-Beta1 expression a plasmid containing the short hairpin interfering RNA
(shRNAi) for TGF-Beta1 (pSUPER-TGFb) was transferred to GRX cells using liposomes. Control plasmid (pSUPER without