Anais da 27º Semana Científica - Hospital de Clínicas de Porto Alegre

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Revista HCPA 2007; 27 (Supl.1)
ADRENOLEUCODISTRIFIA LIGADA AO X: ANÁLISE GENÔMICA DE UMA SÉRIE DE CASOS EM FAMÍLIAS
BRASILEIRAS
FERNANDA DOS SANTOS PEREIRA; MARIANA LA BELLA-COSTA; LUIZA RENCK; URSULA MATTE; CARMEM
VARGAS; ROBERTO GIUGLIANI; LAURA JARDIM
A adrenoleucodistrofia ligada ao X (X-ALD) é uma doença genética do metabolismo dos peroxissomo, onde a degradação dos
ácidos graxos muito longos saturados (VLCFA) encontra-se impedida ou limitada. Estima-se que 1:42.000 recém-nascidos
apresentem essa doença. A X-ALD afeta principalmente a córtex adrenal, mielina do sistema nervoso central e axônios centrais e
periféricos. A variabilidade fenotípica é muito alta e não pode ser prevista pelos níveis dos VLCFA, nem pela história familiar,
limitando a correlação genótipo-fenótipo. O gene da X-ALD (ABCD1), contém 10 exons e ocupa 20 kb do DNA genômico no
braço longo do cromossomo X (Xq28). Mais de 300 mutações foram identificadas e a maioria delas (58%) é “privada”. O
objetivo deste estudo é avaliar o espectro mutacional das famílias com X-ALD atendidas no Hospital de Clínicas de Porto Alegre.
Foram avaliados 12 casos-índices (homens com diagnóstico bioquímico de X-ALD) através da amplificação dos 10 éxons do gene
ABCD1 por PCR e posterior triagem de mutações por SSCP (Single Strand Conformational Polymorphism). Os éxons que
apresentaram padrão de migração diferente da amostra controle, foram seqüenciados de forma automatizada. Até o momento, foi
realizado SSCP para os éxons 1A, 1B, 2, 5, 6 e 8/9 e os casos-índices de três famílias apresentaram padrão de migração alterado
por SSCP. Após seqüênciamento automatizado dessas amostras, as mutações encontradas foram: 1430delA e P623L. A análise
molecular será oferecida aos demais membros das famílias dos casos-índices que tiveram mutação identificada. A triagem de
mutações continua para os demais casos-índices. Apoio: FIPE-HCPA, CNPq
CARACTERIZAÇÃO IMUNOFENOTÍPICA DE CÉLULAS MESENQUIMAIS E DE MEDULA ÓSSEA DE RATOS
ISOGÊNICOS LEWIS.
ANA AYALA LUGO; ANA HELENA PAZ, ANDRES CANEDO DELGADO, ANA PAULA ALEGRETTI, LUDMILA DO
VALE MIQUELITO, EDUARDO PASSOS, NADINE CLAUSELL, ROBERTO GIUGLIANI, ELIZABETH CIRNE LIMA,
EDUARDO PAIM ROHDE.
O emprego de modelos animais em várias propostas experimentais e terapêuticas con células tronco propiciam informações préclínicas
importantes ao homem. Por este motivo, a caracterização destes modelos é necessária para o desenvolvimento de novas
alternativas terapêuticas.Técnicas de imunofenotipagem, mediante o uso de anticorpos monoclonais contra antígenos de superfície
específicos das diferentes linhagens celulares, têm promovido um avanço na definição e classificação das células-tronco. O
objetivo deste estudo é caracterizar e quantificar, por citometria de fluxo, as células tronco mesenquimais na medula óssea de
ratos Lewis. Células mononucleares da medula óssea, obtidas do fêmur e tíbia, foram isoladas mediante gradiente de densidade
com Ficoll. 1x 106 células foram submetidas à análise por citometria de fluxo FACScalibur (Becton Dickison), com anticorpos
monoclonais anti-CD34-PE, CD45-FITC, CD90-PE, CD11b/c-FITC, CD45RA-PE e CD3-FITC, CD29-PE/Cy5, CD71-PE e
CD44-FITC.As análises dos resultados foram realizadas mediante o software cell quest. A padronização de técnicas que avaliem a
quantidade das células tronco mesenquimais na medula óssea permitem o estudo e desenvolvimento de novas estratégias
terapêuticas para transplante celular.
DIFERENCIAÇÃO DE CÉLULAS TRONCO MESENQUIMAIS A PARTIR DO MEIO CONDICIONADO DA LINHAGEM
HEPG2
CAROLINA URIBE CRUZ; G.R. SANTOS; G. BALDO; M.C. BELARDINELLI; R. GIUGLIANI; U. MATTE
Introdução: Dentro da medula óssea, existe uma população de células não hematopoiéticas chamadas Células Tronco
Mesenquimais (CTMs) que podem ser separadas e expandidas em cultura com alta eficiência. Controlando as condições de
cultura, pode-se induzir à diferenciação dessas células em múltiplas linhagens, como, por exemplo, em hepatocyte-like. Uma
abordagem para induzir diferenciação de CTMs é através do uso de meio condicionado (MC) de linhagens celulares. A linhagem
HEPG2 se origina de um hepatocarcinoma humano, e suas células secretam diversas citocinas para o meio. Objetivo: Observar se
ocorre diferenciação de CTM murina em hepatócitos através do uso de meio condicionado da linhagem HepG2. Materiais e
métodos: As CTMs foram isoladas por combinação de gradiente de Ficoll e da sua capacidade de se aderir à placa de cultivo. As
mesmas foram mantidas em condições normais de cultura. O meio condicionado foi obtido por contato com a linhagem HepG2
por 24 hs, coletado e centrifugado. Como controle negativo se utilizou meio D-MEM que não esteve em contato com células. As
CTMs foram cultivadas com MC por 21 dias. Foram realizadas análises morfológicas (H&E) e inmunohistoquímicas para Alfafetoproteína
(AFP) y CK 8. Resultados: Observou-se que, depois de 21 dias de cultura com MC, as CTMs apresentaram um
aumento do citoplasma y marcações positivas para AFP y CK 8. Conclusão: As CTMs podem ser induzidas in vitro, a expressar
marcas próprias de hepatócitos como AFP y CK 8, utilizando MC a partir da linhagem celular HepG2. Assim, este trabalho cria
una nova oportunidade para iniciar futuras investigações no transplante de hepatócitos e terapia celular para doenças hepáticas.
USO DE LINGUAGEM INFORMAL EM UM PROTOCOLO DE TRANSFERÊNCIA GÊNICA PARA FIBROBLASTOS
COM GANGLIOSIDOSE GM1
ANTÔNIO CARLOS BURLAMAQUE NETO; GABRIELLA REJANE DOS SANTOS; CLARISSE RICCI; LEON LISBÔA;
CARMEN LÚCIA BEZERRA MACHADO; URSULA MATTE
INTRODUÇÃO: A avaliação dos protocolos de terapia gênica no nosso laboratório nos levou a detectar a necessidade de
desenvolvimento de abordagens mais próximas e compreensíveis para os métodos envolvidos. Apresentamos aqui a utilização de
um protocolo para transfecção de culturas de fibroblastos com gangliosidose GM1 para gerar uma história em quadrinhos.
MÉTODOS: Um roteiro foi elaborado e discutido pelos autores. Os rascunhos foram desenhados por uma das autoras, que os
finalizou após revisão pelo grupo. Este material foi implementado através da comparação entre execuções do procedimento de
transfecção utilizando seu protocolo formal sozinho e associado aos quadrinhos. Os relatos de experiência dos executores foram
então analisados. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Produzimos material didático de linguagem informal que pode ser associado a