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Comunicación
Efecto del método de congelación sobre la calidad
in vitro del semen de maclio cabrío Verato
M. a B. Pintado*, B. Pérez y L. Gfl**
INTRODUCCIÓN
La tendencia hacia la intensificación en las explotaciones
caprinas ofrece a la inseminación artificial posibilidades
de aplicación práctica. La estacionalidad
de la hembra puede controlarse mediante tratamientos
hormonales inductores del estro; sin embargo, la
única forma de vencer la baja capacidad fertilizante
del semen en primavera (2) es la congelación de eyaculados
obtenidos en estación sexual.
La congelación del semen de macho cabrío ha sido
abordada fundamentalmente de dos formas diferentes
(3), una basada en la utilización de un diluyente
de leche descremada y glicerol al 7% (1) y otra que
emplea TRIS, ácido cítrico, glucosa, yema de huevo y
glicerol al 4% (5). En ambos casos la eliminación del
plasma seminal es un paso esencial para asegurar
una mayor fertilidad (3), ya que en éste se localiza una
enzima, que en determinadas condiciones reacciona
con las lecitinas de la yema de huevo de los diluyentes,
originando lisolecitinas, de acción tóxica para los
espermatozoides (6). La eliminación del plasma se realiza
lavando el semen mediante la centrifugación del
mismo. En el caso del método de CORTEEL (1) se emplea
una solución salina y el de RITAR y SALAMON (5)
el mismo diluyente que para la congelación, pero sin
glicerol.
Con nuestro planteamiento experimental se persiguieron
dos objetivos. El primero fue estudiar cuál de
las dos metodologías se adaptaba mejor a las características
seminales de la raza Verata, ya que el comportamiento
del plasma seminal depende, entre otros,
de factores raciales e individuales (5).
En segundo lugar, se trató de hacer un estudio detallado
de las fases de preparación del eyaculado,
predilución, centrifugación, refrigeración y congelación,
con el fin de establecer cuál afectaba en mayor
grado la viabilidad in vitro del esperma, y saber así
dónde habría que centrar los esfuerzos futuros para
mejorar la técnica.
* Departamento de Producción Animal, CIT-INIA, carretera
de La Coruña, km 5,900 (esquina Dehesa de la Villa),
28040-Madrid.
* Departamento de Patología (Reproducción). Facultad de
Veterinaria. Miguel Servet, 177. Zaragoza.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se realizaron siete réplicas del protocolo experimental,
utilizando en cada una de ellas la mezcla de
primeros eyaculados de ocho machos veratos de un
año de edad obtenidos con vagina artificial durante
los meses de enero-febrero. Una vez realizada la mezcla
se tomaron muestras para una primera valoración
del eyaculado y la determinación de la concentración.
La mezcla se dividió en dos alícuotas que se mantuvieron
en un baño a 30° C.
Cada alícuota se asignó al azar a una de las dos técnicas
de congelación estudiadas, la primera descrita
por CORTEEL (1) (técnica A) y la segunda por RITAR y
SALAMON (5) (técnica B). Las etapas analizadas fueron
las siguientes:
— Etapa 1: Primera dilución con la solución de lavado
a 30° C.
— Etapa 2: Segunda dilución con la solución de lavado
tras la primera centrifugación.
— Etapa 3: Dilución previa a la refrigeración, después
de la segunda centrifugación, a temperatura
de laboratorio.
— Etapa 4: Precongelación a 5 o C.
— Etapa 5: Descongelación en seco a las 24-48 horas.
El lavado del semen se realizó centrifugándolo dos
veces a 700 G durante diez minutos. En ambos sistemas
de congelación se utilizó una dilución final de
400 millones/cc, en pajuelas de 0,5 ce, selladas con alcohol
de polivinilo, que se congelaron en vapores de
nitrógeno líquido durante cuatro minutos. La descongelación,
a las 24-48 horas, se realizó sumergiendo
las pajuelas treinta segundos en un baño a 40° C y colocando
el contenido en viales de plástico sin diluyente.
En cada uno de los pasos se analizaron los siguientes
parámetros:
— Motilidad individual (%), observada por ai menos
dos personas en un monitor de televisión conectado
al microscopio.
— % de acrosomas normales en espermatozoides
incluidos en glutaraldehído y observados con un
microscopio de contraste de fases (4).
— % de espermatozoides con reacción de endósmosis.
Para esta prueba se utilizó una solución