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EFECTO DEL MÉTODO DE CONGELACIÓN SOBRE LA CALIDAD IN VITRO DEL SEMEN... 83
Tabla I
Estudio de las mínimas diferencias significativas entre
las etapas de cada método de congelación según los
tres parámetros estudiados. Distintas letras indican
valores estadísticamente diferentes
flítodo
de
Corteel
flétodo
da -Ritar
y Salaraon
ñotilidad
Acrosoaías
Endósaosis
(lotüidad
Acrosonías
Endosóosis
Etapa 1
A,C
A
A
A
A
A
Etapa 2
B
A
6
A,B
B
A
Etapa 3
A
A
A
B
C
A
Etapa 4
C
B
A
B
C
B
Etapa 5
pone una pérdida de viabilidad. Comparando los resultados
de la primera dilución (etapa 1) y la pre-refrigeración
(etapa 3) no existen diferencias significativas
en ninguno de los tres parámetros estudiados. La
solución de lavado utilizada en el método B, sin embargo,
sí sjrpone un efecto perjudicial, al menos en
cuanto a motilidad y acrosomas normales.
La refrigeración, sin embargo, no supone una disminución
de la viabilidad con el diluyente a base de
yema de huevo. Comparando los resultados obtenidos
al final del período de equilibración, justo antes de la
congelación (etapa 4), en el método B, se puede observar
que los acrosomas y la motilidad mantienen
valores semejantes a los de la etapa 3, es decir, antes
de comenzar la refrigeración. El diluyente a base de
leche descremada (método A), en cambio, no es capaz
de aportar una acción protectora de la misma calidad,
y por ello hay una disminución significativa de la
motilidad y de los acrosomas normales.
El semen de macho cabrío es muy sensible al choque
frío (8) y la yema de huevo es un gran sistema de
protección durante la refrigeración, posiblemente por
esa razón el método B permite que los espermatozoides
estén en mejores condiciones antes de la congelación.
Los datos obtenidos a partir de la prueba de endósmosis
resultan difíciles de valorar. Una posible explicación
de la bajada en la capacidad de reacción durante
la etapa 2 con el método de CORTEEL es que la
solución de lavado utilizada en esta técnica es hipoosmótica
de por sí, con lo cual la diferencia entre ésta y
la solución de endósmosis es menor y la endósmosis
posiblemente tenga lugar más rápidamente. De confirmarse
este hecho, al cabo de treinta minutos, que
es el tiempo establecido en nuestro protocolo, numerosos
espermatozoides ya habrían roto su membrana,
apareciendo al microscopio como si no hubieran reaccionado.
Esta característica de la solución de lavado explica
B
C
B
C
D
B
también por qué hay una bajada significativa de la
motilidad en esta etapa 2 del método A. Los espermatozoides
reaccionan a una baja presión osmótica captando
agua, al ser la membrana plasmática inelástica;
con el aumento de volumen intracelular, se produce
un impedimento físico para el funcionamiento normal
del flagelo, lo que da lugar a una motilidad inferior y
de peor calidad.
Por último, es de destacar el comportamiento en la
prueba de endósmosis de los espermatozoides refrigerados
por la técnica 2. Hay una diferencia muy significativa
en la capacidad de reacción desde la prerrefrigeración
(etapa 3) a la precongelación, que puede
ser debida a varias causas; la primera es que efectivamente
con esta técnica se producen muchas lesiones
de la membrana plasmática. Sin embargo, los altos
valores de motilidad y acrosomas íntegros no parecen
coincidir con esta posibilidad. Otra explicación
podría ser que la prueba de endósmosis realizada antes
de la congelación, y puesta a punto para esperma
recién recogido, no sea la adecuada para células que
ya han sufrido un período de equilibración con crioprotectores
penetrantes (glicerol) y no penetrantes
(yema de huevo), que de alguna manera hayan podido
alterar la difusión del agua a través de la membrana.
Es más plausible que el efecto sea debido al recubrimiento
que del espermatozoide hacen las proteínas
de la yema de huevo, porque el glicerol está presente
tanto en el diluyente de RITAR y SALAMON como en
el de CORTEEL, y en este último en un porcentaje mayor.
CONCLUSIONES
Según nuestros datos, parece más aconsejable utilizar
la técnica de CORTEEL para la congelación de semen
de macho cabrío de raza Verata. Esta confiere
una buena protección durante la fase de lavado y
también en el proceso de congelación propiamente dicho.
Sin embargo, el diluyente de CORTEEL no aporta
condiciones óptimas durante la refrigeración, siendo
mejor el descrito por RITAR y SALAMON. Es muy posible
que este defecto en la primera técnica pueda ser
paliado añadiendo al diluyente de leche descremada
alguna proteína de mejor acción crioprotectora.
BIBLIOGRAFÍA
1. CORTEEL, J. M.: «Viabilité des spermatozoides de
bous conserves et congeles avec ou sans leur plasma
seminal: effet du glucose». Ann. Biol. Anim. Biophys.,
14: 741-745, 1974.
2. CORTEEL, J. M.; BARIL, G.; LEBOEUF, B., y NUNES, J.
E: «Goat semen technology». En The male in Farm
Animal Reproduction, editado por M. Courot, Martinus
Nijhoff, La Haya, 1984.
3. CORTEEL, J. M., y PAQUINON, M.: «Preservation of the
male gamete (Ram, Buck, Boar)». X Congreso Internacional
de Reproducción Animal e Inseminación Artificial
Urbana, vol. II: 20-27,1984.