12 temel kurs - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği

Ulusal Kan Merkezleri ve Transfüzyon T›bb› Kursu XII - Temel Kurs
içinde aktif AHG oldu¤unu gösterir.
Yorum
1- Zay›f D testi prosedürüne mutlaka bir diluent kontrol testi veya bir direkt antiglobulin testi efllik etmelidir. Anti-
D tüpünde aglütinasyon varken kontrol tüpünde olmamas› testin pozitif oldu¤unu gösterir. Kan D+ olarak s›n›fland›r›lmal›d›r.
Bu tür eritrositleri "D-, Du +" olarak rapor etmek do¤ru de¤ildir.
2- Anti-D testinde aglütinasyon olmam›flsa sonuç negatiftir. Bu, eritrositlerde D aktivitesi yok demektir ve D- olarak
s›n›fland›r›l›r.
3- Kontrol testi pozitif ise, zay›f D testi için geçerli bir yorum yap›lamaz. Bu durumda, e¤er test edilen eritrositler
hastaya ait ise Rh- kan verilmelidir; e¤er ba¤›flç›ya ait ise eritrositler transfüzyon için kullan›lmamal›d›r.
Protokol 8: Otoaglütinasyonu Da¤›tmak ‹çin Thiol Ajanlar› Kullan›m›
Prensip: So¤ukta reaktive olan otoantikorlar›n neden oldu¤u aglütinasyonu da¤›tmak için, pentamerik IgM moleküllerinin
inter-subunit disulfit ba¤lar›na yap›flan Thiol ajanlar› kullan›labilir. Thiol ajanlar› ile kendi kendine aglütine olan
eritrositlerin (otoaglütinasyon) önlenmesi, kan gruplama testinde kullanmak için uygun bir örnek elde etmemizi sa¤lar.
Araç-Gereç
1- 0.01 M dithiothreitol (DTT) veya 0.1 M 2-mercaptoethanol (2-ME)
2- Phosphate-buffer saline (PBS), pH 7.3’e ayarlanm›fl.
3- Y›kanm›fl eritrosit süspansiyonu.
Prosedür
1- PBS’de % 50’lik bir konsantrasyona kadar eritrositler dilüe edilir.
2- Süspansiyona eflit miktarda PBS’de 0.01 M DTT veya PBS’de 0.1M 2-ME eklenir.
3- 37 °C’de 10 dakika (2-ME) veya 15 dakika (DTT) bekletilir.
4- Eritrositler 3 kez y›kan›r.
5- ‹fllemden geçmifl eritrositler % 3-5’lik SF konsantrasyonunda dilüe edilir ve kan gruplama testinde kullan›l›r.
Protokol 9: DAT Pozitif Eritrositlerde Rh Tayini
Prensip: Eritrositlerin IgG ile yo¤un bir flekilde kapland›¤› durumlarda antiglobulin-reaktif serum ile test yapmak zordur
ve yüksek proteinli aglütine edici ajanlarla yap›lan testler de pratik de¤ildir. Eritrosit membran bütünlü¤ünü bozmadan
veya antijen yap›s›n› de¤ifltirmeden eritrositi antikordan ay›rmak gerekebilir. Elüsyon prosedürü, aktif antikor
fleklinde hareket edenlerden farkl› bir flekilde, antikorsuz eritrositin haz›rlanmas› amac›yla kullan›l›r.
Prosedür
1- Uygun ebattaki bir test tüpüne 1 hacim y›kanm›fl, antikor kapl› eritrosit süspansiyonu ve 3 hacim serum fizyolojik
konur. Di¤er bir tüpe, eflit miktarlarda SF ile çal›fl›lmas› düflünülen antijen (genellikle D) için pozitif olan
y›kanm›fl, eritrosit süspansiyonu konur. Bu bize ay›rma iflleminin antijen reaktivitesine zarar verip vermedi¤ini
kontrol etmemizi sa¤lar.
2- Her iki tüpün içerikleri yaklafl›k 45 °C’de 10-30 dakika bekletilir. Tüp s›k s›k çalkalanmal›d›r. Bekletme süresi,
antiglobulin reaktivitesinin gücünü gösteren, antikor kaplama derecesi ile kabaca orant›l› olmal›d›r.
3- Eritrosit ve SF’i ay›rmak için tüpler santrifüj edilir. SF solüsyonu at›l›r.
4- Elüsyon ifllemi yap›lmam›fl eritrositlerdeki antiglobulin test sonuçlar› ile elüsyon yap›lm›fl eritrositlerdeki direkt
antiglobulin test sonuçlar› karfl›laflt›r›lmak suretiyle, önceden antikor kaplanm›fl eritrositlerin antikordan kurtulma
derecesi test edilir. E¤er antikor kaplanma durumu azalm›fl ama hala mevcut ise 1’den 3’e kadar olan basamaklar
tekrar edilir.
5- Elusyon yap›lm›fl eritrositler, düflük proteinli anti-D ile test edilir.
- 74 -