12 temel kurs - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği

Ulusal Kan Merkezleri ve Transfüzyon T›bb› Kursu XII - Temel Kurs
genlerle do¤ru bir biçimde test edilemezler. IgG’yi DAT pozitif eritrositlerden uzaklaflt›rmak için gerekli elüsyon ifllemleri
yap›lmal›d›r. Bu ifllemlerde proteolitik enzimlerin ve thiol (ZZAP) ayrac› içeren solüsyonlar›n kullan›lmas› LW a , Fy a ,
Fy b , S, s, Yt a , Ch, Rg, Pr, ve Tn antijenlerini ve Kell kan grup sisteminin tüm antijenlerini denatüre eder. Bu ayraçlar
IgG’nin uzaklaflt›r›lmas› için ›s› ve chloraquine gibi tekniklerin baflar›s›z oldu¤u durumlarda ve yukar›daki antijenler d›-
fl›ndaki antijenlerin tespiti için yap›lan testlerde kullan›lmal›d›r.
Bu testler çal›fl›l›rken, kontrol hücreleri ve test hücreleri ayn› anda çal›fl›lmal› ve ifllemler paralel olarak yap›lmal›-
d›r. Bu tür testlerin titiz bir biçimde kontrol edilmesi gerekir.
Di¤er Antiglobulin Testler (Teknikler)
Antiglobulin testlerde klasik tüp yöntemine alternatif olarak kullan›lan yöntemler, test sonuçlar›n› okuma ve de¤erlendirmede
daha standart teknikler ve daha az subjektiflik sa¤layabilir.
Klasik tüp yöntemine alternatif olarak en çok kullan›lan üç yöntem;
1- ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay),
2- SPRCA (Solid-Phase Red Cell Adherence Assay),
3- Jel test’dir.
ELISA
ELISA yöntemi eritrosite ba¤l› IgG’nin tespiti, ölçülmesi ve fetomaternal hemorajinin gösterilmesi için kullan›lmaktad›r.
Eritrositler incelenirken teste genellikle ELAT (Enzyme-Linked Antiglobulin Test) denir.
SPRCA
‹mmünolojik testlerde kullan›lan kat›-faz mikroplate teknikleri, art›k eritrosit antijenlerinin ve antikorlar›n›n tan›mlanmas›nda
da kullan›lmaktad›r. Direkt testte; mikroplate kuyucuklar› antikor ile kaplanm›flt›r ve eritrositler kuyucuklara
eklenir. Eritrositler ilgili antijenlerle kapl› ise kuyucuklar›n kenarlar›na yap›fl›r. E¤er antijen-antikor reaksiyonu oluflmazsa,
eritrositler kuyucuklar›n dibine dü¤me fleklinde çöker. ‹ndirekt testte; antijenik yap›s› bilinen reagen eritrositler
ile mikroplate kuyucuklar› kaplanm›flt›r. Test serumu veya plazma, eritrosit kapl› kuyucuklara eklenir. Daha önceden
saptanm›fl bir sürede 37 °C’de inkübe edilir. ‹nkübasyon sonras› ba¤lanmam›fl serum proteinlerini uzaklaflt›rmak için
fosfat tamponlu solüsyon ile y›kan›r. Anti-IgG kapl› indikatör eritrositler teste eklenir. Testler daha sonra reagen eritrositlere
ba¤l› IgG antikorlara, indikatör eritrositler üzerindeki anti-IgG’lerin ba¤lanmas› için santrifüj edilir. E¤er indikatör
eritrositler kuyucuklar›n kenarlar›na yap›fl›rsa reaksiyon pozitif olarak de¤erlendirilir. Kuyucuklar›n taban›na dü¤me
fleklinde çökerlerse bu antijen-antikor reaksiyonunun oluflmad›¤›n› gösterir.
Jel Testi
Jel test 1986 y›l›nda Lapierre ve arkadafllar› taraf›ndan gelifltirilmifltir. Jel sistemi; moleküllerin çap›na göre tutulmas›
prensibine dayan›r. Test serumu ve/veya reagen eritrositler tüplere tepeden ilave edilir, inkübasyon sonras› tüpler
santrifüj edilir. Santrifüj reaksiyon kar›fl›m›n› jel içerisine çeker. Aglütinasyon oluflmufl ise aglütinatlar jel kolonun tepe
k›sm›nda tutulur. Büyük aglütinatlar, mikrotüplerin tepesinde toplan›rken, daha küçükleri mikrotüplerin daha afla¤›daki
bölümlerinde filtre edilirler ve aglütine olmam›fl hücreler mikrotüplerin taban k›sm›na çökerler. Uygun bir biçimde
seçilmifl reagenlerle jel testi, eritrosit yüzey antijenleri veya serum antikorlar›n›n tarama ve tan›mlanmas›nda ve crossmatch
testlerinin yap›lmas›nda kullan›labilir. Jel testinde DAT ve IAT’lar çal›fl›l›rken eritrositlerin y›kanmas›na ve antiglobulin
kontrol eritrositlerinin teste eklenmesine gerek yoktur.
- 94 -