12 temel kurs - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği
12 temel kurs - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği
12 temel kurs - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Ulusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong> T›bb› Kursu XII - Temel Kurs<br />
Testin Yap›l›fl›<br />
Direkt Antiglobulin Test (DAT)<br />
fiekil 2, DAT’›n klasik yöntemini göstermektedir. Bu test için inkübasyon gerekmez. Test eritrositleri AHG eklenmeden<br />
önce, SF ile dört kez y›kan›r. Test, cam tüplerde gerçeklefltirilir <strong>ve</strong> negatif DAT’lere antiglobulin kontrol eritrositleri<br />
eklenir.<br />
DAT için kan örnekleri etilendiamintetraasetikasit (EDTA) içeren antikoagülanl› tüplere al›n›r. EDTA; test eritrositlerinin<br />
kompleman› invitro yakalamas›n› engeller. Kompleman komponentleri özellikle C 4 , 4 °C <strong>ve</strong>ya bazen oda ›s›s›nda<br />
p›ht›laflm›fl kan örneklerinde eritrositlere ba¤lan›r. ‹nvivo bulunmay›p, invitro eritrositlere ba¤l› kompleman komponentleri,<br />
DAT için p›ht›laflm›fl kan örnekleri kullan›ld›¤›nda hatal› pozitif sonuçlara neden olabilir.<br />
Malzemeler:<br />
1- 10x75 <strong>ve</strong>ya <strong>12</strong>x75 mm’lik cam tüpler<br />
2- Santrifüj<br />
3- Benmari 37 °C’de<br />
4- NaCl % 0.9’luk<br />
5- EDTA’l› kan örne¤i (% 2-5’lik eritrosit süspansiyonu haz›rlamak için)<br />
6- AHG reageni (Coombs serumu, polispesifik)<br />
7- IgG kapl› antiglobulin kontrol eritrositleri (Coombs kontrol eritrositleri)<br />
Yöntem:<br />
1- Hasta eritrositlerinden SF içerisinde % 2-5’lik eritrosit süspansiyonu haz›rlan›r. Bu süspansiyondan bir damla test<br />
tüpüne konur. SF ile eritrositler dört kez y›kan›r. Üstteki süpernatan tamamen döküldükten sonra 1-2 damla polispesifik<br />
AHG reageni ila<strong>ve</strong> edilir.<br />
2- 1000xg’de bir dakika santrifüj edilir. Santrifüj sonras› aglutinasyon de¤erlendirilir <strong>ve</strong> sonuçlar kaydedilir (Tablo 3)<br />
3- Negatif AHG testlerini konfirme etmek için IgG kapl› kontrol eritrositlerinden 1 damla tüplere ila<strong>ve</strong> edilir.<br />
1000xg’de bir dakika santrifüj edilir. Santrifüj sonras› aglutinasyon de¤erlendirilir, en az 2+ aglutinasyon görülmelidir.<br />
‹ndirekt Antiglobulin Testi (IAT)<br />
Bir IAT klasik yöntemi fiekil 2’de gösterilmifltir. Serum <strong>ve</strong> eritrositler belirlenen bir zaman içerisinde, daha önceden<br />
saptanm›fl bir s›cakl›kta inkübe edilir. AHG serum eklenmeden önce, eritrositler an az 4 kez SF ile y›kan›r.<br />
Genelde Coombs kontrol hücreleri olarak adland›r›lan reagen antiglobulin kontrol eritrositleri negatif teste eklenir.<br />
Antiglobulin kontrol eritrositleri genellikle IgG antikorlar› ile kapl› O grubu eritrositlerdir. Antiglobulin kontrol eritrositleri,<br />
aktif AHG serumunun testlerde mevcut oldu¤unu göstermek için kullan›l›r. Ticari antiglobulin kontrol hücreleri,<br />
negatif antiglobulin kontrol testlere eklendi¤inde genellikle en az 2+ olarak reaksiyon gösterirler.<br />
‹nsan serum <strong>ve</strong>ya plazmas›n›n küçük bir miktar›, AHG serumunu k›smen <strong>ve</strong>ya tamamen nötrlefltirebilir. ‹nsan serumunun<br />
SF’le 1/4000 oran›ndaki dilüsyonunun bir hacmi, eflit hacimdeki bir AHG serumunu nötrlefltirmek için yeterlidir.<br />
- 90 -
Change language