12 temel kurs - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği
12 temel kurs - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği
12 temel kurs - Kan Merkezleri ve Transfüzyon Derneği
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Ulusal <strong>Kan</strong> <strong>Merkezleri</strong> <strong>ve</strong> <strong>Transfüzyon</strong> T›bb› Kursu XII - Temel Kurs<br />
Not<br />
1- <strong>Kan</strong> gruplama antiserumlar› (örne¤in Anti-D) ile test edilen eritrositlerde aglütinasyon yoksa, elüsyon yap›lm›fl<br />
eritrositlerin tüm antijenik reaktivitesini kaybetmedi¤i gösterilmelidir. Görünüfle göre, bir diluent kontrolüne<br />
paralel olarak D- eritrositler, anti-c <strong>ve</strong> anti-e ile test edilmelidir. Eritrositler, her iki antiserum ile de aglütine olmuyorsa<br />
D testindeki negatif sonuçlar flüphelidir.<br />
2- Eritrosit <strong>ve</strong> SF, 56 °C’de, 3 dakika tutmak suretiyle, alternatif bir elüsyon tekni¤i de kullan›labilir. Bu ›s›da daha<br />
uzun süre bekletmek antijenik reaktiviteye zarar <strong>ve</strong>recektir.<br />
Protokol 10: Asit Glisin/EDTA ‹le Eritrositlerden Antikorlar›n Ayr›lmas›<br />
Prensip: Asit glisin/EDTA, eritrosit membranlar›ndan antikor moleküllerini ay›rmak için kullan›labilir. Prosedür, bafllang›çta<br />
eluate haz›rlanmas›nda oldu¤u gibi baflar› ile kullan›lm›flt›r. Bu prosedür daha sonra s›kl›kla kan gruplama testleri<br />
<strong>ve</strong>ya adsorbsiyon prosedürlerinde kullan›lacak eritrositlerden IgG’yi ay›rmak için kullan›lmaya bafllanm›fl <strong>ve</strong> halen<br />
de kullan›lmaktad›r. Kell sistemi antijenleri d›fl›ndaki di¤er eritrosit antijenlerinin tamam›n›n tan›mlanmas›nda asit glisin/EDTA<br />
uygulamas› kullan›labilir. Kell antijeninin belirlenmesinde asit glisin/EDTA uygulanm›fl eritrositler kullan›lamaz.<br />
Asit glisin/EDTA uygulanm›fl eritrositler otoimmün antikorlara ba¤l› serolojik problemlerin araflt›r›lmas› ile ilgili<br />
adsorbsiyon prosedürleri için kullan›labilir. Asit glisin/EDTA uygulanm›fl eritrositler bundan baflka antikor ba¤lanmas›-<br />
n› art›ran enzimlerin dilüe solüsyonlar›na da uygulanabilir.<br />
Araç-Gereç<br />
1- 20 ml distile <strong>ve</strong>ya deiyonize suda 2 g disodyum etilendiamintetraasetik asit (Na 2 EDTA) eritilerek haz›rlan›r (%<br />
10’luk EDTA).<br />
2- 100 ml SF (tampon olmayan) solüsyonuna 0.75 g glisin eklenerek dilüe edilerek haz›rlanm›fl 0.1 M glisin-HCl<br />
tampon solusyonu (pH 1.5) (Konsantre HCI kullanarak pH 1.5’a ayarlan›r).<br />
3- 100 ml distile <strong>ve</strong>ya deiyonize suda <strong>12</strong>.1 g tris (hidroksimetil) aminometan hidroklorür (TRIS) <strong>ve</strong> 5.25 g sodyum<br />
klorür (NaCI) eritilerek haz›rlanm›fl 1.0 M TRIS-NaCI.<br />
Prosedür<br />
1- Eritrositler izotonik serum fizyolojik solüsyonu ile 6 kez y›kan›r.<br />
2- Bir test tüpünde, 20 hacim 0.1 M asit glisin-HCI (pH 1.5) ile 5 hacim % 10’luk EDTA kar›flt›r›l›r. Bu asit<br />
glisin/EDTA ajan›d›r.<br />
3- Temiz bir tüpe 10 hacim y›kanm›fl eritrosit süspansiyonu konur.<br />
4- 20 hacim asit glisin-HCI eklenir.<br />
5- Tüpün içindekiler iyice kar›flt›r›l›r.<br />
6- 2-3 dakikadan fazla olmamak kayd› ile kar›fl›m oda s›cakl›¤›nda bekletilir.<br />
7- Bir hacim 1.0 M TRIS-NaCI eklenir <strong>ve</strong> tüp kar›flt›r›l›r.<br />
8- Eritrositlerin s›v›lardan ayr›lmas› için 900-1000 xg’de, 1-2 dakika santrifüj edilir.<br />
9- Supernatan s›v› aspire edilir <strong>ve</strong> at›l›r.<br />
10- Eritrositler SF solüsyonunda 4 kez y›kan›r.<br />
11- Y›kanm›fl eritrositler anti-IgG ile teste tabi tutulur.<br />
<strong>12</strong>- Anti-IgG ile reaksiyona girmiyorsa eritrositler kan gruplama <strong>ve</strong>ya adsorbsiyon prosedürü için kullan›ma haz›r<br />
demektir.<br />
Not:<br />
1- Eritrositlerin asid glisin/EDTA içinde fazla bekletilmesi, eritrosit membranlar›na geri dönüflümsüz zarar <strong>ve</strong>rir.<br />
2- Muamele yap›lm›fl eritrositleri tiplerken kullan›l›r.<br />
- 75 -
Change language