Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

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teil, die Signalstärke der Banden quantifizieren zu können. In der Abb. 18 ist die Kine-
tikanalyse von Makrophagen gezeigt.
In der Abb. 19 A ist die densitometrischen Auswertung der Kinetikanalyse für unstimu-
lierte Knochenmarksmakrophagen gezeigt. Die ersten Abbaufragmente von FITC-OVA
sind nach ca. 30 min. mit einem Molekulargewicht von ca. 40 kD erkennbar. Die Stärke
diese Abbaufragmentes nimmt bis zu einer Antigenpulse- Dauer von 50min zu und
nimmt dann wieder ab. Ab einer Inkubationsdauer von 60 min. ist ein weiteres Abbau-
fragment von FITC-OVA mit einem Molekulargewicht von ca. 30 kD nachweisbar. Dieses
FITC-OVA Fragment hat schwächere Signale als das 40 kD Fragment und liegen men-
genmäßig nur geringfügig über der Nachweisgrenze des Nachweissystems. Kleinere Frag-
mente konnten nicht nachgewiesen werden.
Die LPS- stimulierten Knochenmarksmakrophagen zeigen eine verzögerte Abbaukinetik
(Abb. 19 B). Hier ist das 40 kD- FITC-OVA Fragment erst nach einem Antigenpulse von
zwei Stunden schwach nachweisbar. Nach einer vierstündigen Inkubation ist das 40 kD-
Fragment stärker nachweisbar. Das 30 kD- FITC-OVA Fragment ist auch nach vier
Stunden Pulsedauer nicht nachweisbar. Auch durch den indirekten, antikörpervermit-
telten Nachweis konnten die Fragmente nicht stärker nachgewiesen werden.
Einen gegenteiligen Effekt auf die Antigenprozessierung zeigt die Aktivierung der Kno-
chenmarksmakrophagen mit γ- Interferon. Das 40 kD- Abbaufragment ist nach sech-
zigminütigem Antigenpulse nachweisbar und wird mit zunehmender Inkubationsdauer
immer stärker (Abb. 19 C). Auch das 30 kD – Abbauprodukt ist gegenüber den LPS -
stimulierten Makrophagen nachweisbar. Dieses Fragment ist bereits nach 120 min
schwach nachweisbar und nimmt mit zunehmender Inkubationsdauer an Signalstärke
zu.
Insgesamt zeigt der Versuch einen deutlich messbaren Einfluss der Aktivierung von
Knochenmarksmakrophagen auf die Prozessierung durch LPS und γ- Interferon. LPS-
Aktivierung führt zu einer verzögerten Prozessierung von FITC-OVA, während γ- Interfe-
ron nur zu einer leichten Verzögerung der Prozessierung im Vergleich zu unstimulierten
Makrophagen führt.