Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Diskussion Seite 144
4.2 In vivo Prozessierung von FITC – OVA
Die effiziente Beladung von MHC Klasse II – Molekülen mit Peptiden erfordert den pro-
teolytischen Abbau sowohl der invarianten Kette als auch der antigenen Proteine [129].
Neuere Studien zeigen, dass für den Abbau der invarianten Kette die Cystein – Protein-
asen Kathepsin S und L essentiell sind. Die invariante Kette wird durch diese Protein-
asen in einem mehrstufigen Prozess abgebaut [159]. Als Endprodukt der Degradation
von Ii werden MHC Klasse II – CLIP Komplexe erhalten [29a]. Diese stellen eine wichtige
Zwischenstufe in der MHC Klasse II restringierten Antigenpräsentation dar.
Weit weniger ist über die am proteolytischen Abbau von Proteinantigenen beteiligten
Proteinasen und Chaperone bekannt. Während in früheren Studien besonders die lyso-
somalen Proteinasen Kathepsin D und B diskutiert wurden [160] [161], geraten in neue-
ren Studien zunehmend weitere Proteinasen in den Fokus der Forschung [129]. Neben
den Cysteinproteinasen Kathepsin L und S werden auch die saure Proteinase Kathepsin
E [162] sowie Legumain diskutiert [34]. Die Rolle von Exoproteinasen wird zudem in Be-
tracht bezogen, insbesondere die Tripeptidylpeptidasen [163].
Um die Prozesse, die am proteolytischen Abbau von Proteinen beteiligt sind, näher zu
erforschen, wurden in dieser Arbeit Experimente mit dem Modellprotein FITC-OVA
durchgeführt. Diese bauten auf früheren Arbeiten auf [121]. In Kinetikexperimenten
wurde versucht, die Kompartimente des endo-/lysosomalen Abbaus von FITC – OVA
näher zu bestimmen. Durch den Einsatz von Proteinase - Inhibitoren wurde versucht,
die an der Degradierung von FITC-OVA beteiligten Proteinasen zu ermitteln. Die Experi-
mentewurdenankultiviertenKMM∅und DC´s der Lewis – Ratte durchgeführt. Dabei
wurden zudem verschiedene Aktivierungsstadien der KMM∅ berücksichtigt. Die präpa-
rative Isolierung eines in vivo generierten Abbaufragmentes und dessen N – terminale
Sequenzierung ergab schließlich Informationen über den potentiellen Abbaumechanis-
mus von FITC – OVA.
4.2.1 Persistenz von FITC – OVA in KMM∅
Da das FITC markierte Ovalbumin nach UV - Aktivierung eine intensive Fluoreszenz e-
mittiert, konnte die Aufnahme von FITC – OVA in KMM∅ mikroskopisch beobachtet
werden. FITC – OVA konnte bereits wenige Minuten nach Antigenzugabe in den
Makrophagen beobachtet werden. Mit Langzeitversuchen konnte gezeigt werden, dass