Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

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Die Dendritischen Zellen zeigen ein ähnliches Aufnahmeverhalten wie die γ -Interferon
Abb. 23 Prozessierung von FITC – OVA durch DC´s und GM-CSF - M∅
KM-Zellen wurden für 8 Tage in der Gegenwart von 2ng rmGM-CSF kultiviert. Nach der Zellernte
erfolgte eine Zellseparation mittels Magnetbeadselektion. Es wurden 5x10 5 DC und 1x10 6 Zellen
der Restpopulation eingesetzt und in 24 Well Platten umgesetzt. Die Antigenzugabe von 25µg
FITC-OVA erfolgte für die angegebene Zeitdauer. Nach Ablauf der Inkubationszeiten wurde die
Zellsolubilisierung in den Platten durchgeführt. Die Solubilisate wurden in der SDS-PAGE
aufgetrennt und anschließend auf eine PVDF-Membran geblottet. Der Nachweis der Fragmente
erfolgte durch Fluoreszenzaktivierung, die Signale wurden mit einer CCD-Kamera aufgezeichnet.
Die Blots wurden densitometrisch ausgewertet. Es wurden für jede Bande 4080 Pixel (0,1 inch 2 )
vermessen und der durchschnittliche Grauwert gegenüber der Zeit aufgetragen. Auf der Abzisse
ist die Inkubationsdauer, auf der Ordinate der mittlere Grauwert der Banden mit einem
Molekulargewicht von 50 kD (blau), 40 kD (pink) und 30 kD (grün) aufgetragen.
A: Dendritische Zellen; B: GM – CSF M∅
stimulierten Makrophagen. Erste Abbauprodukte mit einem Molekulargewicht von 40
kD sind jedoch bereits bei einer Inkubationszeit der Zellen mit dem FITC-OVA von 15
min nachweisbar. Das 40 kD Fragment wird mit zunehmender Inkubationszeit stärker
und erreicht ein Maximum an Intensität nach einer einstündigen Inkubation. Danach