Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Ergebnisse Seite 73
3.1.3 In vitro Verdauung von FITC markiertem Ovalbumin
Für den Einsatz in den Zellversuchen war es nötig zu untersuchen, ob die enzymatische
Verdauung des FITC- markierten Proteins mit Kathepsin B und D zu den bereits durch
Vorarbeiten bekannten Abbauprodukten[121] des DIG- Ovalbumin führt. Wie in Abb. 13
zu sehen ist, zeigt auch das FITC - markierte Ovalbumin eine deutliche pH- Abhängig-
keit. Die enzymatische Verdauung von FITC- OVA mit Kathepsin B zeigt nur ein schwa-
ches Abbauprodukt im Bereich um 40 kD, dieses wird jedoch von der Ausgangsbande
überstrahlt (Spur B). Zusätzlich ist eine sehr schwache Bande bei 38 kD sichtbar. Bei
pH 4,6 zeigt das Kathepsin B eine deutlich stärkere Wirkung auf das markierte Protein:
So sind die Banden bei 40 kD und 38 kD deutlich zu erkennen. Ferner zeigen sich zwei
weitere Banden bei 28 kD und 20 kD (Spur B’ ). Die Reaktion mit Kathepsin D ergibt bei
pH 5,9 fünf Abbauprodukte, drei Abbauprodukte bei 42 kD, 38 kD und 20 kD sind
stark ausgeprägt, die Banden bei 30 kD und 22 kD sind schwach sichtbar (Spur C).
Beim saueren pH- Wert von 4,6 resultieren ebenfalls fünf Abbauprodukte, im Gegensatz
zur Verdauung bei pH 5,9 gibt es aber eine Veränderung in der Stärke der einzelnen
Banden. Insgesamt sind alle Banden schwächer ausgeprägt (Spur C’ ).
Bei der Doppelverdauung von FITC- OVA mit Kathepsin B und D ergibt sich bei pH 5,9
das gleiche Bild wie bei der Verdauung mit Kathepsin D (Spur D). Bei pH 4,6 zeigen sich
zusätzliche Banden im Bereich um 30 kD (Spur D’ ). Auch hier ähnelt das erhaltene
Bandenmuster dem mit Kathepsin D erhaltenen Muster.