Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung
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Ergebnisse Seite 67<br />
Die Abb. 10 zeigt die Chromatogramme <strong>der</strong> analytischen und präparativen Aufreinung<br />
von Ovalbumin. Um die ungefähren Elutionsbedingungen zu best<strong>im</strong>men, wurde zuerst<br />
in einem analytischen Lauf die Retentionszeit von OVA Grade II best<strong>im</strong>mt. Diese wurde<br />
mit <strong>der</strong> Retentionszeit von OVA Grade VII verglichen. Da die Retentionszeit an einer<br />
Ionentauschermatrix unter identischen Bedingungen (Puffer, Gradient und<br />
Konzentration des <strong>Protein</strong>s) nur noch von den Moleküleigenschaften abhängig ist,<br />
Abb. 10 Chromatographische Aufreinigung von OVA Grade II<br />
Alle Absorbtionsmessungen erfolgten bei 280 nm A: Analytische Aufreinigung von 100<br />
µg OVA Grade II über Poros HQ/F-Anionentauscher. 4 ml/min, 0-100 % in 20 CV B:<br />
Präparative Reinigung von 50 mg OVA Grade II mit POROS HQ/F-Säule. 4 ml/min, 0-<br />
100 % in 20 CV. C: Gelfiltration an Superose 12 mit Peak-Eluat aus B. D: Präparative<br />
Reinigung von 1gOVAGradeIImitMonoQ 10/10-Säule.<br />
des <strong>Protein</strong>s) nur noch von den Moleküleigenschaften abhängig ist, eluieren identische<br />
<strong>Protein</strong>e am selben Punkt <strong>im</strong> Elutionsgradienten. Obwohl OVA Grade VII fast vollständig<br />
demanosyliert vorliegt, ist <strong>der</strong> Elutionspunkt bei <strong>der</strong> Anionenaustausch-<br />
Chromatographie nahezu identisch. In <strong>der</strong> Abb. 10-A ist <strong>der</strong> analytische Lauf von 100µg<br />
OVA Grade II gezeigt. Dieses Chromatogramm ist nahezu identisch mit dem Lauf von
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