Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Ergebnisse Seite 80
Abb. 16 Fluoreszenzmikroskopischer Nachweis der Antigenaufnahme
Die Aufnahmen wurden von elf Tage kultivierten Knochenmarksmakrophagen gemacht, die an Tag
10 in 24 Well-Platten in einer Dichte von 1x10 6 Zellen/ml umgesetzt wurden. 25 µg FITC-OVA/Well
wurden für 4h zugegeben. Vor der Aufnahme wurden die Zellen zweimal mit PBS gewaschen und in
Makrophagenmedium aufgenommen. Alle Aufnahmen wurden am Invertmikroskop FLUOVERT
(LEITZ) im Durchlicht erstellt bei einer Vergrößerung von 400x .
A: Durchlichtaufnahme einer 11 Tage KMM∅-Kultur , nur sichtbares Licht
B: Flureszenzaufnahme einer 11 Tage KMM∅-Kultur, nur UV-Licht Aktivierung
C: Flureszenzaufnahme einer 11 Tage KMM∅-Kultur, UV-Licht Aktivierung + sichtbares Licht
D: Flureszenzaufnahme einer 11 Tage KMM∅-Kultur, die für 72h mit γ-INF stimuliert wurde; UV-
Licht Aktivierung + sichtbares Licht.
Die Pfeile zeigen auf Zellcluster
So konnte gezeigt werden, dass es hinsichtlich der Aufnahme Unterschiede zwischen
den einzelnen Zellen gibt (Abb. 16). Zellen, die in Clustern vorliegen, nahmen eine grö-
ßere Menge an Antigen auf als Zellen, die einzeln vorlagen. Dieses konnte sowohl bei
unstimulierten als auch bei stimulierten Knochenmarksmakrophagen gezeigt werden.
Langzeitversuche zeigten zudem, dass die Fluoreszenz in den Zellen auch 72h nach Pro-
teingabe noch messbar war. Dies weißt auf eine lange Persistenz des Antigens oder des
Proteinmarkers FITC in den Zellen hin.
Auffällig ist weiterhin, dass die γ-INF stimulierten Zellen größere Cluster ausbilden als
die unstimulierten Zellen( Abb. 16 C+D). Dies deutet auf eine stärkere Endozytose - Ak-
tivität bei diesen Zellen hin. Die Aufnahme des markierten Proteins zeigt keinerlei toxi-
sche Auswirkung auf die Vitalität der Zellen (Abb. 16 A). Die Abb. 16 B zeigt deutlich,
dass nach dem Waschen der Zellen das zugegebene Antigen ausschließlich in den Zellen
nachweisbar ist. Die Hintergrundstrahlung ist äußerst gering. Damit war für die weite-