Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Material und Methoden Seite 22
gezüchtet. Für die Untersuchungen wurden männliche Ratten im Alter von drei Monaten
eingesetzt.
Die F10-Zellinie sind Astrozytenzellen der „Lewis“-Ratte, die fakultativ MHC Klasse II
exprimieren und eine wichtige Rolle bei der Initiierung der Immunantwort im Gehirn
spielen [82].
2.2 Methoden der Zellkultur
2.2.1 Puffer, Lösungen und Medien für die Zellkultur
Die hier aufgeführten Puffer, Lösungen und Medien wurden unter sterilen Bedingungen
mit bidestiliertem Wasser angesetzt und, wenn nicht anders angegeben, bei 4°C gelagert.
Gey´s Lösung: Zur selektiven Lyse der Erythrozyten in Zellpräparationen wurde diese
Lösung eingesetzt (150 mM NH4Cl mit 10 mM Tris/HCl (pH 9,0) auf pH 7,5 eingestellt)
[83]
Glutaminlösung: L-Glutamin ist eine Aminosäure, die für kultivierte Zellen essentiell
ist. Glutamin ist unter Kulturbedingungen für die meisten Zellen eine der wichtigsten
Kohlenstoffquellen und stellt gleichzeitig einen Ausgangsstoff für die weitere Synthese
von Biomolekülen und Proteinen dar. Da Glutamin sehr labil ist, wurde die 200 mM
Stammlösung dem Medium erst kurz vor Kulturbeginn in einer Endkonzentration von
2 mM zugesetzt. Die Stammlösung wurde bei –20°C gelagert.
PBS: Es handelt sich um eine physiologische Kochsalzlösung (140 mM NaCl, 10 mM
NaH2PO4; pH 6,6). Sie wurde als Stammlösung in zehnfacher Konzentration angesetzt
und vor Gebrauch 1:10 verdünnt, wodurch sich der pH auf 7,4 erhöht.
Pen/Strep - Lösung: Um Kontaminationen möglichst gering zu halten, wurde den Kul-
turmedien eine Stammlösung der Antibiotika Penicillin (10 4 IU/ml) und Streptomycin
(10 mg/ml) 1% zugesetzt.
Trypanblau - Lösung: Diese Färbelösung (0,5% (w/v) Trypanblau, 150 mM NaCl) diente
zur Bestimmung der Zellzahl und der Zellvitalität. Die Lösung wurde nach dem Ansetzen
durch ein Papierfaltenfilter filtriert.