Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

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das Material in der zweidimensionalen Analyse als äußerst heterogen. Ein Teil des Mate-
rials fokussiert bereits bei einem pI von vier. Möglicherweise ist dies auch eine Folge der
Markierung von OVA mit FITC.
Eine klare Fokussierung war nicht zu erreichen, da aufgrund der geringen Menge an ab-
gebautem Protein eine hohe Konzentration an Ausgangsmaterial eingesetzt werden
musste. Zudem musste sehr lange belichtet werden, bis die Spots sichtbar wurden. Da-
durch kam es zu einer deutlichen Überbelichtung im Bereich des Ausgangsmaterials.
Beim Kathepsin B – Verdau sind die typischen Abbauprodukte mit einem Molekularge-
wicht von 40 kD und 38 kD zu erkennen. Diese zeigen einen geringfügig erhöhten pI von
ca. 5,3. Zusätzlich ist das 28 kD Fragment mit einem pI von ca. 5,1 nachweisbar, das
in der 1D- Analyse (Abb. 13, Spur B’ ) gefundene 20 kD Fragment jedoch nicht (Abb. 14
B).
Der enzymatische Abbau mit Kathepsin D zeigt die typischen Abbaufragmente mit ei-
nem Molekulargewicht von 42 kD, 38 kD und 30 kD (Abb. 14 C). Zusätzlich ist das
Fragment mit ca. 28 kD gegenüber der 1D-Analyse (Abb. 13, Spur C’ )deutlich zu erken-
nen. Auch hier ist wie beim Kathepsin B – Verdau das 20 kD- Fragment nicht nachweis-
bar. Der isoelektrische Punkt der Abbauprodukte liegt auch hier zwischen fünf bis
sechs. Das 30 kD Abbauprodukt zeigt dabei den basischsten pI mit ca. 5,0, das 42 kD
Fragment mit einem pI von ca. 5,9 den sauersten Wert. Die anderen Fragmente zeigen
einen isoelektrischen Punkt von ca. 5,3 bis 5,5.
Beim Doppelverdau mit Kathepsin B und D konnte in der zweiten Dimension keine klare
Trennung der Spots erreicht werden, da einzelne Spots bei der Fluoreszenzaktivierung
stark überstrahlen. Die Spots bei 42 kD und 38 kD zeigen einen pI von ca. 5,1, das ba-
sische Fragment bei 5,9 ist nicht mehr nachweisbar. Dieses Fragment mit einem Mole-
kulargewicht von 42 kD unterscheidet sich hinsichtlich des pI von dem 42 kD Fragment
des Kathepsin D- Verdaus. Zusätzlich sind im Bereich um 30 kD und einem pI um 5,1
zahlreiche Spots nachweisbar, die sich jedoch nicht klar auflösen lassen. Auffällig beim
Doppelverdau mit Kathepsin B und D ist der eingeschränkte pI- Bereich der Fragmente,
die alle zwischen ca. 5,0-5,4 liegen.
Die 2D-Analyse des enzymatischen Abbaus von FITC- Ovalbumin zeigt, dass Unter-
schiede im pI bei den Abbaufragmenten trotz identischen Molekulargewichts vorliegen.