Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Material und Methoden Seite 44
untersuchenden Moleküls. Für amphotere Moleküle bestimmen der isoelektrische
Punkt des Moleküls und die Stabilität bei verschiedenen pH- Werten die Seperati-
onsstrategie. Bei einem pH über dem pI des zu untersuchenden Moleküls ist das Mole-
kül positiv geladen. Ist das Protein zudem bei diesem pH stabil, kann es mittels eines
Anionenaustauschers gereinigt werden. Bei umgekehrten Verhältnissen sollte ein Kati-
onentauscher gewählt werden. Weiterhin spielen die beteiligten Elutionspuffer bei der
Spezifität der Bindung eine große Rolle. Das Gegenion fällt hierbei stärker ins Gewicht.
Auch die Konformation der zu untersuchenden Moleküle hat Einfluß auf die Trennbe-
dingungen. [102]
2.4.3 Basisaufbau des FPLC-Systems
Das FPLC (FAST PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY) - System der Firma Pharmacia
ist ein automatisiertes Chromatographiesystem, das es dem Benutzer erlaubt, reprodu-
zierbar die verschieden Arten der Flüssigkeits - Chromatographie durchzuführen. Durch
die elektronische Steuerung können Parameter wie Flußrate und Gradientenverlauf
konstant gehalten sowie komplexe Abläufe programmiert werden. Das Basissystem be-
steht aus dem Chromatographie Kontroller LCC 500, zwei P-500 Kolbenpumpen, der Pe-
ristaltikpumpe P-1, dem Motorventil MV-7, dem Monitor UV-1, dem Zweikanalschreiber
REC - 482 sowie dem Fraktionssammler FRAC-100. Mit diesem System können Drücke
bis zu 5 MPa aufgebaut werden, wodurch hohe Flußraten auch bei fest gepackten Säu-
len möglich sind.
Abb. 7 Übersichtsschema der FPLC-Anlage