Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Diskussion Seite 149
mehrstufige Abbau von Proteinen, der zum bioaktiven Wirkstoff führt, ist häufig be-
schrieben worden. Als klassisches System gilt die Aktivierung von Insulin, die über drei
Schritte erfolgt [198]. Möglicherweise wird auch die verstärkte Sekretion von Prostaglan-
din [178] oder NO [179] durch die Inhibitoren verhindert, die beide einen negativen Ef-
fekt auf die MHC Klasse II – Expression ausüben. Hier kann ein Einfluss auf Synthese-
vorstufen oder benötigte Enzyme durch die Proteinaseinhibitoren nicht ausgeschlossen
werden.
Bei den γ-Interferon stimulierten Makrophagen ist solch starker Einfluss der Proteina-
seinhibitoren Pepstatin A und Leupeptin nicht messbar. Auch in diesem Fall gibt es kei-
ne qualitativen Unterschiede bei den generierten Fragmenten. Die Prozessierung von
FITC – OVA konnte nicht inhibiert werden. Auch bei der Abbau - Kinetik zeigen die γ-
Interferon stimulierten KMM∅ keine großen Unterschiede zu unstimulierten Makropha-
gen. Einzig das 40 kD – Fragment ist erst nach fünfzig Minuten nachweisbar. Pepstatin
A zeigt keinen Einfluss auf die Kinetik der Antigenprozessierung bei unstimulierten
Makrophagen. Das 40 kD FITC–OVA Fragment ist nach fünfzig Minuten nachweisbar.
Bei γ- Interferon stimulierten KMM∅ ist kein Einfluss von Pepstatin A auf die Kinetik der
Antigenprozessierung zu messen. Bei Leupeptin behandelten γ-KMM∅ stellt sich dage-
gen wieder die selbe Kinetik wie bei unstimulierten, nicht mit Inhibitoren behandelten
Makrophagen ein. Hier gilt möglicherweise ein ähnlicher Mechanismus wie bei den LPS
– stimulierten Makrophagen.
4.2.4 Gezielte Inhibition von endo- /lysosomalen Proteinasen
Insgesamt zeigten die Kinetikexperimente, dass durch die Proteinase - Inhibitoren in der
gewählten Inhibitor - Konzentration ein Abbau von FITC – OVA in Makrophagen nicht
blockiert werden konnte. Ähnliches ist auch in der Literatur bei vergleichbaren Studien
zur Antigenprozessierung festgestellt worden [167,168]. Studien an Knock-out Mäusen
haben gezeigt, dass weder Kathepsin B noch Kathepsin D für die Antigenprozessierung
notwendig sind [180]. In neueren Studien wird neben Kathepsin S [129] auch Kathepsin
E eine wichtige Rolle bei der Antigenprozessierung zugeschrieben [181]. Möglicherweise
sind auch weitere Proteinasen an der Prozessierung beteiligt. Hier könnte die erst kürz-
lich entdeckte Proteinase Legumain eine wichtige Rolle spielen [34]. Zudem könnte auch
ein komplexes, Multi - Domänen Enzym mit proteolytischer und Chaperon Aktivität an
der Prozessierung beteiligt sein [182].