Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung
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Ergebnisse Seite 75<br />
Da sich die durch enzymatische Behandlung erhaltenen Bandenmuster in <strong>der</strong> 1D- Ana-<br />
lyse stark ähnelten (Abb. 13), wurden nur die Ansätze bei pH 4,6 untersucht. Auffällig<br />
war, dass die entstandenen Fragmente in einem engen pI- Bereich lagen, <strong>der</strong> zwischen<br />
fünf und sechs lag.<br />
Abb. 14 2D-Analyse von enzymatisch abgebautem FITC – Ovalbumin<br />
1µg FITC Ovalbumin wurde mit Kathepsin B und/o<strong>der</strong> Kathepsin D für 4h bei 37°C inkubiert.<br />
Anschließend erfolgte die Trennung in <strong>der</strong> ersten D<strong>im</strong>ension nach dem isoelektrischen Punkt.<br />
Die Trennung in <strong>der</strong> zweiten D<strong>im</strong>ension erfolgte nach dem Molekulargewicht in <strong>der</strong> SDS-PAGE.<br />
Der Nachweis erfolgte durch Fluoreszenzaktivierung <strong>der</strong> FITC-Gruppe und Aufzeichnung <strong>der</strong><br />
Signale mit einer CCD - Kamera.<br />
A= FITC-OVA, B= FITC-OVA + Kat. B, C= FITC-OVA + Kat. D, D= FITC-OVA + Kat. B + D<br />
Gezeigt ist nur <strong>der</strong> pI-Bereich von 4-7.<br />
Die Abb. 14a zeigt die zweid<strong>im</strong>ensionale Auftrennung von FITC- OVA. Ovalbumin hat<br />
einen theoretischen pI von 5.1. Die zweid<strong>im</strong>ensionale Auftrennung zeigt, dass <strong>der</strong><br />
Hauptteil des <strong>Protein</strong>s bei diesem pI fokussiert. Aufgrund <strong>der</strong> Manosylierung zeigt sich
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