Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Diskussion Seite 147
lich aus Makrophagen und Granulozyten besteht, das schwerere Abbauprodukt mit 40
kD schon nach fünfzehn Minuten schwach nachweisbar. Auch das leichtere 30kD -
Fragment ist früher nachweisbar, wenn auch nur sehr schwach.
Dendritische Zellen zeichnen sich durch eine erhöhte Präsentationsleistung und die Fä-
higkeit zur Primärstimulation von T-Zellen aus [18]. Diese Zellen verfügen über sehr effi-
ziente Mechanismen zur Aufnahme von Antigenen. Besonders bemerkenswert ist die Fä-
higkeit zur Makropinozytose und die Aufnahme von Glykoproteinen über Mannosere-
zeptoren [169]. Dies ermöglicht es den DC´s innerhalb von kürzester Zeit viel Antigen
aufzunehmen und zu konzentrieren. Daher ist es möglich, dass durch die rezeptorver-
mittelte Endozytose eine höhere Konzentration an FITC-OVA in die DC aufgenommen
wird und die Abbauprodukte trotz geringerer Zellzahl nachzuweisen sind.
Bemerkenswert bei den Kinetikversuchen ist, dass es keinerlei qualitative Unterschiede
im Abbau des FITC – OVA durch verschieden aktivierte KMM∅ und DC gibt. In allen Fäl-
len sind die gleichen Abbauprodukte nachweisbar, ein frühes Fragment mit 40 kD und
ein weiteres Produkt mit 30 kD. In früheren Studien zur Antigenprozessierung konnte
bei verschiedenen B - Zell – Klonen kein qualitativer Unterschied festgestellt werden
[167]. Der RT-PCR – Nachweis einiger bekannter Proteinasen zeigte, dass die Makropha-
gen diese Enzyme unabhängig von ihrem Aktivierungsgrad alle für die Antigenprozessie-
rung beschriebenen Proteinasen expremieren. Dies konnte in unserer Arbeitsgruppe
auch für d0 und d3 Langerhans – Zellen nachgewiesen werden. Quantitative Unter-
schied im Expressionsgrad sind mit der RT-PCR jedoch nicht nachweisbar, dies müsste
durch eine kompetetive PCR erfolgen [170].
4.2.3 Einfluß von Proteinase - Inhibitoren auf die Prozessierung von FITC-OVA
Um Hinweise auf die an der Prozessierung von FITC – OVA beteiligten Proteinasen zu
erhalten, wurden gezielte Proteinaseinhibitions - Versuche durchgeführt. Hierbei wurde
der Einfluss von zwei Breitbandinhibitoren, Pepstatin A und Leupeptin auf die Kinetik
der Antigenprozessierung untersucht. Pepstatin A ist ein Inhibitor von sauren Protein-
asen wie Kathepsin D, Leupeptin ist ein potenter Inhibitor von SH – Proteinasen wie Ka-
thepsin B [171]. Für die Kinetikexperimente wurden beide Inhibitoren in einer für die
Zellen nicht toxischen Konzentration eingesetzt. Bei dieser Konzentration ist in einer
früheren Arbeit über die Prozessierung von Conalbumin durch Makrophagen die Wirk-
samkeit der Inhibitoren beschrieben worden [172]. Mittels dieser Experimente sollte