Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Inhaltsverzeichnis Seite i
1. Einleitung 1
1.1 Die Antigenpräsentation 2
1.2 Antigenpräsentierende Zellen 3
1.2.1 Dendritische Zellen 3
1.2.2 Mononukleare Phagozyten 5
1.3 MHC-Klasse II restringierte Antigen-Präsentation 6
1.3.1 Struktur der MHC-Klasse II-Moleküle 8
1.3.2 Die invariante Kette 10
1.3.3 Funktion des DM-Moleküls bei der Peptidbeladung von MHC-Klasse II
Molekülen 12
1.4 Problemstellung der Arbeit 14
2. Material und Methoden 16
2.1 Grundaustattung 16
2.1.1 Allgemeine Laborgeräte 16
2.1.2 Plastikwaren 16
2.1.3 Chemikalien und Reagenzien 17
2.1.4 Puffer für proteinbiochemische Arbeiten 17
2.1.5 Detergentien 17
2.1.6 Modellantigen 18
2.1.7 Proteasen und Proteaseninhibitoren 18
2.1.8 Zytokine und Antikörper 19
2.1.9 Molekulargewichtsstandards 21
2.1.10 Versuchstiere und Zellinien 21
2.2 Methoden der Zellkultur 22
2.2.1 Puffer, Lösungen und Medien für die Zellkultur 22
2.2.2 Seren zur Supplementierung von Medien und Puffern 23
2.2.3 Kulturbedingungen 23
2.2.4 Organentnahme und Zellpräparation 24
2.2.4.1 Knochenmarkpräparation 24
2.2.4.2 Lyse der Erythrozyten 24
2.2.4.3 Bestimmung der Zellzahl und der Zellvitalität 25
2.2.5 Kryokonservierung und Rekultivierung von Zellen 25
2.2.6 In vitro Generation von dendritischen Zellen 25
2.2.6.1 Dendritische Zellen aus Knochenmarkskulturen 26
2.2.6.2 Anreicherung von DC aus Knochenmarkskulturen 26
2.2.6.3 Beladung von magnetischen Partikeln mit Antikörper 26
2.2.7 Gewinnung von Knochenmarksmakrophagen 27
2.2.8 Solubilisierung von Zellen 27
2.2.8.1 Solubilisierung mit ionischem Detergens 27
2.2.8.2 Solubilisierung mit nichtionischem Detergens 27
2.3 Elektrophoretische Methoden 28
2.3.1 Allgemeines 28
2.3.2 Eindimensionale SDS - Polyacrylamid Gelelektrophorese 29
2.3.2.1 Materialien und Lösungen 29
2.3.2.2 Zusammensetzung der Gele 30