Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

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die jeweilige cDNA – Präparation intakt war, wurde stets ein Test auf Aktin
durchgeführt. Die Tab. 12 gibt das Ergebnis der RT-PCR Analysen wieder. Während die
PCR bei unstimulierten und γ - Interferon stimulierten Makrophagen starke Signale
ergaben, waren diese bei den LPS stimulierten Makrophagen stets schwächer.
Ein Unterschied im Expressionsmuster der gängigen lysosomalen Proteinasen konnte
bei unterschiedlich stimulierten Knochenmarks – Makrophagen nicht festgestellt
werden. Sowohl die Teste auf die SH - Proteinasen Kathepsin B, H, L, S sowie Legumain
als auch die Teste auf die Aspartat – Proteinasen Kathepsin D und E ergaben positive
Resultate.
Die Makrophagen exprimieren auf mRNA – Ebene die gleiche Ausstattung an den
Leitproteinasen des endo- / lysosomalen Systems. Weitere Tests auf die Proteinasen
Kathepsin O, W, K und U ergaben negative Resultate.
3.1.6 Aufnahme von FITC-OVA durch KMM∅
Die Markierung des Proteinantigens mit Fluorescein bot den Vorteil, die endozytotische
Aufnahme des Ovalbumins in die Zellen im Fluoreszenzmikroskop sichtbar machen zu
können. Hierzu wurden Knochenmarkszellen für 11 Tage in Gegenwart von M-CSF kul-
tiviert, um KMM∅ zu erhalten. Ein Teil der Knochenmarkskulturen wurde zusätzlich von
Tag 8 an mit γ-Interferon stimuliert. Nach Umsetzen der Knochenmarkskulturen an Tag
11 in 24 – Well Platten wurden die Zellen für 4h mit 25µg FITC-OVA/1x10 6 Zellen inku-
biert. Nach Ablauf der Inkubationszeit wurden die Zellen zweimal in PBS gewaschen
und unter dem Fluoreszenz – Mikroskop untersucht.