Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

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Um Hinweise auf die an der Antigenprozessierung beteiligten Enzyme zu erhalten, wurde
die Kinetikanalyse unter dem Einfluss des Aspartat- Proteinaseinhibitors Pepstatin A
durchgeführt. Pepstatin A inhibiert die lysosomalen Proteinasen Kathepsin D und E. Die
Wirksamkeit des Proteinaseinhibitors unter den gewählten Bedingungen ist in [126] be-
schrieben worden. Bei der eingesetzten Konzentration sind keine toxischen Nebenwir-
kungen festzustellen. Ein Einfluss auf die generierten FITC-OVA Peptide durch den Pro-
teinaseinhibitor Pepstatin A konnte jedoch bei keinem Aktivierungszustand der Kno-
chenmarksmakrophagen festgestellt werden. Die Fragmente stimmen vom Molekularge-
wicht her mit den ohne Einfluss des Inhibitors entstandenen überein. Es konnten nur
Abbau - Fragmente von FITC-OVA mit einem Molekulargewicht von 40 kD und 30 kD
nachgewiesen werden.
Wie die Kinetikanalyse in Abb. 20 A für unstimulierte Knochenmarksmakrophagen zeigt,
ist keinerlei Einfluss des Proteinaseinhibitors Pepstatin A feststellbar. Auch hier sind
Abbaufragmente mit einem Molekulargewicht von 40 kD bereits nach einer halben
Stunde messbar. Mit Zunahme der Antigen- Inkubationsdauer nimmt die Signalstärke
dieses Fragments leicht ab. Das Maximum des Signals liegt bei einem Antigenpulse von
fünfzig Minuten, danach nimmt die Stärke wieder ab. Nach einer sechzigminütigem In-
kubationsdauer kann das 30 kD Fragment nachgewiesen werden. Die Signalstärke die-
ses Fragments nimmt mit zunehmender Inkubationsdauer leicht ab. Fragmente mit
niedrigerem Molekulargewicht sind nicht nachweisbar.
Gegenüber den ohne Inhibitor behandelten LPS- stimulierten Makrophagen ist das 40
kD Fragment bereits nach einer Inkubationsdauer von zwanzig Minuten nachweisbar
(Abb.20 B). Die Signalstärke dieses Fragments nimmt mit zunehmender Antigenpulse-
Dauer kontinuierlich zu. Ein Maximum wird nach vierstündigem Pulse erreicht, eine
weitere Zunahme nach längerer Proteingabe ist nicht messbar. Das 30 kD Fragment ist
nach sechzig Minuten nachweisbar, mit zunehmender Dauer der Antigengabe nimmt
das Signal leicht zu.
Ein Effekt des Proteinaseinhibitors Pepstatin A auf die Kinetik der Antigenprozessierung
ist auch bei den mit γ- Interferon stimulierten Knochenmarksmakrophagen messbar
(Abb. 20 C). Das 40 kD Abbaufragment ist nach fünfzig Minuten nachweisbar, die Sig-
nalstärke nimmt bis zum Maximum bei 240 Minuten zu. Das 30 kD Fragment ist erst
nach vier Stunden nachweisbar.