Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

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festgestellt werden, ob entweder eine SH- oder eine saure Proteinase für die ersten Pro-
zessierungschritte von FITC – OVA verantwortlich ist.
Beide Inhibitoren zeigten in in vitro Assays, dass sie die enzymatische Degradierung von
Ovalbumin durch Kathepsin B oder D vollständig inhibieren können [121,168]. Die In-
hibitionsversuche zeigten, dass in den für die Kinetikexperimente gewählten Konzentra-
tionen kein Einfluss auf die Qualität des Abbaus von FITC – OVA messbar ist. So ent-
stehen auch in der Gegenwart der Inhibitoren die gleichen Abbauprodukte mit einem
Molekulargewicht von 30 kD und 40 kD. Bei den unstimulierten Makrophagen ist auch
keine Veränderung in der Kinetik erkennbar. Hier zeigt sich das gleiche Bild wie bei den
nicht mit Proteinaseinhibitoren behandelten Zellen.
Ein starker Einfluss der Inhibitoren auf die Kinetik der Prozessierung ist bei den LPS –
stimulierten Makrophagen messbar. Während bei den LPS – stimulierten KMM∅ in Ab-
wesenheit der Inhibitoren das 40 kD - Fragment erst nach zwei Stunden nachweisbar
ist, kann es unter dem Einfluss von Leupeptin bereits nach 50 Minuten nachgewiesen
werden. Ist während des FITC-OVA Pulse Pepstatin A zugegen, so ist das 40 kD – Frag-
ment bereits nach zwanzig Minuten nachweisbar. In beiden Fällen ist das 30 kD – Frag-
ment nachweisbar, unter Leupeptin – Einfluss nach 120 min, bei Pepstatin A nach 60
min.
LPS ist ein Endotoxin gram- negativer Bakterien und beschleunigt inflammatorische
Prozesse [173]. LPS aktiviert Makrophagen und Endothelzellen. Dabei stimuliert LPS die
Freisetzung wichtiger Mediatoren wie TNF und freier Radikale [174]. Zudem werden
zahlreiche Gene nach Aktivierung translatiert [175]. So könnten nach LPS – Aktivierung
zelleigene Proteinaseinhibitoren wie Cystatin C freigesetzt werden [176]. Hierdurch wer-
den große Teile des endo- lysosomalen Prozessierungsapparates inhibiert, so dass das
FITC – OVA nur sehr langsam abgebaut wird. Dadurch dauert es länger, bis sich für den
Nachweis genügend Material angesammelt hat. In einer neuen Studie konnte gezeigt
werden, dass LPS die Prozessierung von boviner RNase und Hühner – Lsozym in
Makrophagen inhibiert [177]. Hier wurde auch gezeigt, dass LPS die Endozytoseleistung
von KMM∅ reduziert. Durch Gabe von Proteinaseinhibitoren wird die Prozessierungsak-
tivität von unstimulierten Makrophagen wiederhergestellt. Dabei wirkt Pepstatin A stär-
ker als Leupeptin. Durch die Inhibitoren wird möglicherweise der weitere Abbau von
Vorstufen der zelleigenen Proteinase - Inhibitoren wie z.B. Cystatin A blockiert. Der