Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung
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Ergebnisse Seite 86<br />
Abb. 19 Kinetik <strong>der</strong> Antigenprozessierung durch KMM∅<br />
KM-Zellen wurden für 11 Tage in <strong>der</strong> Gegenwart von M-CSF kultiviert. An Tag 10 wurden<br />
die Zellen in einer Dichte von 1x10 6 Zellen/ml in 24 Well-Platten umgesetzt. Die<br />
St<strong>im</strong>ulation mit LPS bzw. γ-INF erfolgte von Tag 8 an und wurde bis zur<br />
Zellsolubilisierung durchgeführt.Die Antigenzugabe von 25µg FITC-OVA erfolgte für die<br />
angegebene Zeitdauer. Nach Ablauf <strong>der</strong> Inkubationszeiten wurde die Zellsolubilisierung in<br />
den Platten durchgeführt. Die Solubilisate wurden in <strong>der</strong> SDS-PAGE aufgetrennt und<br />
anschließend auf eine PVDF-Membran geblottet. Der Nachweis <strong>der</strong> Fragmente erfolgte<br />
durch Fluoreszenzaktivierung, die Signale wurden mit einer CCD-Kamera aufgezeichnet.<br />
Die Blots wurden densitometrisch ausgewertet. Es wurden für jede Bande 4080 Pixel (0,1<br />
inch 2 ) vermessen und <strong>der</strong> durchschnittliche Grauwert gegenüber <strong>der</strong> Zeit aufgetragen. Auf<br />
<strong>der</strong> Abzisse ist die Inkubationsdauer, auf <strong>der</strong> Ordinate <strong>der</strong> mittlere Grauwert <strong>der</strong> Banden<br />
mit einem Molekulargewicht von 50 kD (blau), 40 kD (pink) und 30 kD (grün) aufgetragen.<br />
A=unst<strong>im</strong>ulierte M∅; B= LPS – St<strong>im</strong>ulation für 72h,1µg/ml; C= St<strong>im</strong>ulation mit 20U rrγ-<br />
IFN für 72h
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