Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung
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Material und Methoden Seite 19<br />
Pepstatin A: Dieses Pentapeptid (Mr 685,91) inhibiert die sauren Proteasen Kathepsin<br />
D und Pepsin. Stammlösung: 1 mg/ml Methanol 20% (Sigma).<br />
PMSF: Phenylmethylsulfonfluorid inhibiert Serinproteasen und einige Cysteinproteasen:<br />
Stammlösung: 100 mM (17,4 mg/ml Methanol).<br />
Trasylol: Aprotinin aus Rin<strong>der</strong>lunge mit inhibitorischer Wirkung auf Kahlliekrein und<br />
zahlreiche intrazelluläre Proteasen sowie Chymotrypsin, Plasmin und Trypsin. Stammlö-<br />
sung: 2,8 mg/ml in ST - Puffer (Bayer AG).<br />
Trypsininhibitor: Inhibitor aus Sojabohnen, <strong>der</strong> Trypsin und an<strong>der</strong>e Serinproteasen<br />
hemmt. Stammlösung: 5mg/ml ST - Puffer (Serva).<br />
E64d: E64d ist ein Derivat von E64, bei dem die Guanidinobutan – Gruppe gegen eine<br />
Alkyl – Gruppe ausgetauscht ist. Hierdurch wird <strong>der</strong> Cysteinproteinaseninhibitor zell-<br />
permeabel. E-64, das aus Kulturen von ASPERGILLUS JAPONICUS isoliert wurde, gilt als<br />
Prototyp <strong>der</strong> Oxiran – Inhibitoren [75].<br />
Cat3: Cat3 ist ein N- Petidyl, O- Acyl Hydroxamat, das selektiv Serin- und Cysteinpro-<br />
teinasen inhibiert. Cysteinproteinasen werden durch die Formation eines Sulphenamid –<br />
Adduktes inhibiert, Serinproteinasen durch Carbamylierung des Serins <strong>im</strong> aktiven Zent-<br />
rums [76].<br />
2.1.8 Zytokine und Antikörper<br />
14-4-4S: Zytotoxischer monoklonaler Antikörper <strong>der</strong> Subklasse IgG2a/Kappa mit Spezi-<br />
fität für I-E k,d,p,r- Determinanten. Er besitzt zusätzlich eine Kreuzreaktivität mit dem<br />
Haplotyp RT1.D <strong>der</strong> Ratte [77].<br />
Anti-Digoxigenin-AP: Polyklonaler Schafs - Antikörper, <strong>der</strong> 100% Reaktivität mit Digo-<br />
xigenin und Digoxin zeigt, jedoch keine Kreuzreaktivität mit an<strong>der</strong>en Steroiden. Fab -<br />
Fragmente wurden durch enzymatische Verdauung mit Papain erhalten und mit alkali-<br />
scher Phosphatase gekoppelt. Der Antikörper wurde <strong>im</strong> Western - Blot verwendet (Ro-<br />
che).<br />
Anti-FITC-POD: Polyklonaler Schafs – Antikörper, <strong>der</strong> eine hohe Affinität zu FITC – De-<br />
rivaten aufweist. Fab – Fragmente wurden durch enzymatische Verdauung mit Papain<br />
erhalten und mit Peroxidase gekoppelt. Der Antikörper wurde <strong>im</strong> Western - Blot verwen-<br />
det (Roche).
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