Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Ergebnisse Seite 90
Proteinase - Inhibitors Leupeptin
Neben den Aspartat- Proteinasen stellen die SH- Proteinasen die zweite Gruppe der lyso-
somalen Endoproteinasen dar. In einem weiteren Versuch wurde daher der Einfluss des
SH- Proteinaseinhibitors Leupeptin auf die Antigenprozessierung untersucht. Leupeptin
zeigt bereits in einer Konzentration von 1µg/ml einen Einfluss auf die Antigenprozessie-
rung [127]. In früheren Arbeiten in unserem Labor wurde bei einer Konzentration von 20
µg/ml keinerlei Proteinaseaktivität der SH- Proteinase Kathepsin B in Knochenmarks-
makrophagen mehr gemessen [126], so dass in diesem Versuch der Inhibitor in dieser
Konzentration eingesetzt wurde.
Auch unter dem Einfluss des Proteinaseinhibitors Leupeptin zeigen die unterschiedlich
stimulierte Makrophagen die von ohne Inhibitor - Einfluss bekannten Abbaufragmente
von FITC-OVA mit einem Molekulargewicht von 40 kD bzw. 30 kD (Abb. 21 A-C). Es
konnten nur FITC-OVA Fragmente nachgewiesen werden, die vom Molekulargewicht her
mit den ohne Inhibitoreinfluß generierten übereinstimmten.
Bei unstimulierten Makrophagen sind erste Abbauprodukte von FITC-OVA mit einem
Molekulargewicht von 40 kD nach einer halben Stunde nachweisbar. Die Stärke des
Signals nimmt mit zunehmender Inkubationsdauer ab. Nach einer zweistündigen
Antigengabe ist zusätzlich das Abbau - Fragment von FITC-OVA mit einem
Molekulargewicht von 30 kD zu sehen. Dieses FITC-OVA Abbauprodukt gibt jedoch nur
ein äußerst schwaches Signal (Abb. 21 A).
Bei LPS- stimulierten Knochenmarksmakrophagen ist das typische FITC-OVA Abbau -
Fragment mit einem Molekulargewicht von 40 kD nach einem Antigenpulse von fünfzig
Minuten nachweisbar (Abb. 21 B). Die Signalstärke dieses FITC-OVA Abbauprodukts
wird mit zunehmender Inkubationsdauer immer stärker. Das FITC-OVA Fragment mit
einem Molekulargewicht von 30 kD ist erst nach vierstündiger Proteingabe messbar.
Dieses zeigt dann jedoch ein recht starkes Signal.
Die γ- Interferon stimulierten Knochenmarksmakrophagen zeigen bereits nach zwanzig-
minütiger Inkubation erste Abbaufragmente von FITC-OVA (Abb. 21 C). So ist das FITC-
OVA Fragment mit einem Molekulargewicht von 40 kD zu diesem Zeitpunkt bereits klar
nachweisbar. Die Signalstärke dieses Fragments nimmt mit zunehmender Inkubations-
dauer deutlich zu und erreicht nach zweistündiger Antigengabe das Signalmaximum.
Auch das leichtere Abbauprodukt von FITC-OVA mit einem Molekulargewicht von 30 kD