Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung
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Material und Methoden Seite 18<br />
sches Detergens und eignet sich gut für die Zellsolubilisierung, da es Proteaseinhibito-<br />
ren nicht in ihrer Funktion einschränkt (Fluka) [73].<br />
Triton X 100: Triton X (t - Octylpheoxypolyetoxyethanol) ist ein weitverbreitetes Deter-<br />
gens für die Solubilisierung von Membranproteinen und an<strong>der</strong>en Komponenten unter<br />
nicht – denaturierenden Bedingungen [73].<br />
2.1.6 Modellantigen<br />
Das Modellantigen Ovalbumin wurde in unterschiedlich reiner Form bei Sigma bezogen<br />
und <strong>im</strong> entsprechenden Puffer gelöst.<br />
2.1.7 Proteasen und Proteaseninhibitoren<br />
CBZ-Phe-Ala-CHN2: Carbobenzoxy – Phe – Ala - diazomethylketon ist ein irreversibler<br />
Inhibitor von Cysteinproteasen wie z.B. Kathepsin B und Papain. Stammlösung :<br />
16 mM (6,3 mg / ml DMSO), bei -20°C gelagert (Bachem) [74].<br />
Complete: Complete - Tabletten hemmen ein breites Spektrum an Serin -, Cystein - ,<br />
Metaloproteasen sowie Calpaine. Durch die opt<strong>im</strong>ierte Zusammensetzung sind sie be-<br />
son<strong>der</strong>s geeignet zum Schutz von <strong>Protein</strong>en, die aus tierischem Gewebe und Zellen, He-<br />
fe o<strong>der</strong> Bakterien isoliert werden. Complete enthält sowohl reversible als auch irreversib-<br />
le Proteaseinhibitoren. Eine Tablette ist ausreichend zur Inhibierung von 50 ml Extrak-<br />
tionslösung. Stammlösung: eine Tablette / 2 ml Aqua bidest. (Roche).<br />
Kathepsin B: Kathepsin B ist eine Cystein - Protease, die über Endoprotease und Pepti-<br />
dyl - Dipeptidase Aktivität verfügt. Es ist eine <strong>der</strong> Hauptproteasen des endo-<br />
/lysosomalen Systems und zeigt breite Spezifität. Kathepsin B ist unter an<strong>der</strong>em an <strong>der</strong><br />
proteolytischen Spaltung <strong>der</strong> invarianten Kette beteiligt. Stammlösung: 1 mg/ml Phos-<br />
phatpuffer (Sigma).<br />
Kathepsin D: Kathepsin D (EC 3.4.23.5) ist eine Aspartyl - Protease und eine <strong>der</strong> do-<br />
minaten <strong>Protein</strong>asen in den endo-/lysosomalen Kompart<strong>im</strong>enten. Es ist an <strong>der</strong> Degra-<br />
dierung zahlreicher endozytierter <strong>Protein</strong>e beteiligt, eine <strong>im</strong>munologische Relevanz wird<br />
diskutiert. Stammlösung: 1 mg /ml Acetatpuffer (Sigma).<br />
Leupeptin: Dieses Tripeptid inhibiert Kathepsin B, Papain, Plasmin und Trypsin, sowie<br />
in geringerem Umfang Kathepsin D. Stammlösung: 1 mg/ml PBS, bei - 20°C gelagert<br />
(Sigma).
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