Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Material und Methoden Seite 46
lumen der Probenschleifen variiert von 25 - 500 µl, größere Probenvolumina werden mit
Hilfe des Superloop aufgetragen. Die MV-7 wird vollständig vom Kontroller gesteuert,
und mit Hilfe der Peristaltik - Pumpe P-1 ist ein vollautomatischer Probenauftrag mög-
lich. Beim Beladen der Probenschleife kommt es durch das interne Totvolumen des Ven-
tils zu einem Probenverlust von mindestens 10µl, es sollte jedoch immer das doppelte
Probenvolumen der Schleife zur Verfügung stehen.
Die Ventilposition I. ermöglicht das Befüllen der Probenschleife, der Puffer fließt direkt
zur Säule. Zum Probenauftrag wird das Ventil in die Position II. geschaltet, der Puffer
fließt nun durch die Probenschleife zur Säule. Die Probe wird somit auf die Säule aufge-
tragen. Mit Hilfe der Position III. ist es möglich, den Pufferwechsel zu automatisieren,
der Puffer wird an der Säule vorbei geleitet.
2.4.3.4 Der Fraktionssammler FRAC -100
Der Fraktionssammler FRAC- 100 ist ein vielseitiges Instrument für das automatische
Sammeln von Fraktionen. Die Fraktionen können nach verschiedenen Kriterien gesam-
melt werden, mit Zeit- oder Volumenbasis. So können uniforme Fraktionen pro Volumen
oder Zeiteinheit gesammelt werden, oder nur die Peak - Fraktionen gesammelt werden.
Der FRAC-100 kann vom Kontroller gesteuert werden, er kann jedoch auch eigenständig
programmiert werden und unabhängig vom Kontroller operieren.
2.4.3.5 Der Monitor UV-1
Der Monitor UV-1 ist ein Zweistrahl - Durchfluß UV - Absorptionsmeter, mit dem die
UV-Absorption bei 214, 254 oder 280 nm gemessen werden kann. Die Meßzellen haben
eine optische Pfadlänge von 3 mm oder 10 mm. Die Ergebnisse können als Absorptions-
(AU) oder Transmission - Einheiten (T%) ausgegeben werden. Die Sensitivität kann von
0,01 bis 2 AU oder 0-100% Transmission eingestellt werden. Das Monitor - Signal wird
in den Kontroller, den Fraktionssammler und in den Schreiber eingespeist.
2.4.4 Gelfiltration mit der Superose 12 - Säule
Superose 12 ist ein quervernetztes Agarose Medium, das für die Gelfiltration von Biomo-
lekülen optimiert ist [103]. Durch den engen Bereich der Partikelgröße erlaubt das Su-
perosemedium hohe Flußraten bei niedrigen Drücken. Die durchschnittliche Partikel-
größe beträgt 10 µm; der optimale Trennbereich liegt zwischen 1 und 100 kD. Das Me-