Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Inhaltsverzeichnis Seite ii
2.3.2.3 Vorbereitungen 31
2.3.2.4 Durchführung der Gelelektrophorese 31
2.3.3 Zweidimensionale Gelelektrophorese 31
2.3.3.1 Materialien und Lösungen 32
2.3.3.2 Vorbereitungen 32
2.3.3.3 Durchführung der zweidimensionalen Elektrophorese 33
2.3.4 Nachweis unmarkierter Proteine durch Silberfärbung 34
2.3.4.1 Reagenzien 34
2.3.4.2 Durchführung 34
2.3.5 Markierung von Proteinen mit Fluorescein oder Digoxigenin 35
2.3.5.1 Materialien und Lösungen 36
2.3.5.2 Durchführung der Markierungsreaktion 36
2.3.6 Proteintransfer auf PVDF-Membran 37
2.3.6.1 Materialien und Lösungen 37
2.3.6.2 Durchführung 38
2.3.7 Nachweis der an PVDF-Membran gebundenen Proteine 39
2.3.8 Nachweis markierter Proteine 39
2.3.8.1 Materialien und Lösungen 40
2.3.8.2 Nachweis von Fluorescein-markierten Proteinen 41
2.3.8.3 Nachweis von Digoxygenin-markierten Proteinen 41
2.4 Chromatographische Methoden 42
2.4.1 Prinzip der Gelfiltration 42
2.4.2 Prinzip der Ionenaustausch- Chromatographie 43
2.4.3 Basisaufbau des FPLC-Systems 44
2.4.3.1 Der Chromatographie-Kontroller LCC 500 45
2.4.3.2 Die Kolbenpumpe P-500 45
2.4.3.3 Das Motorventil MV-7 45
2.4.3.4 Der Fraktionssammler FRAC -100 46
2.4.3.5 Der Monitor UV-1 46
2.4.4 Gelfiltration mit der Superose 12 - Säule 46
2.4.4.1 Proben- und Puffervorbereitung 47
2.4.4.2 Durchführung der Gelfiltration 47
2.4.4.3 Regeneration der Säule 48
2.4.5 Anionenausch- Chromatographie mit POROS HQ/F und MonoQ HR10/10 48
2.4.5.1 Proben und Puffervorbereitung 48
2.4.5.2 Durchführung der Anionenaustauschchromatographie 49
2.5 Enzymatische Verdauung der Modellproteine in vitro 49
2.5.1 In vitro Verdauung der unmarkierten Modellantigene 50
2.5.2 In vitro Verdauung der markierten Modellantigene 50
2.6 Durchführung der intrazellulären Prozessierung von markierten Antigenen 51
2.7 Molekulargenetische Arbeiten 52
2.7.1 Isolierung von Gesamt- RNA aus eukaryontischen Zellen 52
2.7.1.1 Einfrieren von Zellen für RNA- Präparationen 52
2.7.1.2 Präparation der RNA 52
2.7.1.3 Photometrische Mengenbestimmung 53
2.7.2 Gelelektrophoretische Auftrennung von Nukleinsäuren 54
2.7.3 PCR – Methoden 55